[发明专利]一种实时荧光RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种检测样品中H5亚型禽流感病毒存在的试剂盒，该试剂盒包括：(1)分别装有RNA 提取液、RT-PCR扩增反应液、阴性质控品、阳性质控品和定量参考品并加盖密封的多个试剂 瓶或管，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中RT-PCR扩增反应液包括耐热 DNA聚合酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂、脱氧核糖核苷三磷酸、正向引物、反向引物，两末端 分别结合有荧光报告基团和荧光淬灭基团的寡核苷酸探针，其特征在于RT-PCR扩增反应液中 用于靶多核苷酸扩增的正向和反向引物的序列分别为：

正向引物AIV-H5-F：5’-GGAGTGGATACGCTGCAGACAAAG-3’

反向引物AIV-H5-R：5’-TTATTAAATTCCCTTCCAACGGCCT-3’；

RT-PCR扩增反应液中所使用的寡核苷酸探针AIV-H5-P的序列为：5’- TCAACTCGATCATTGACAAAATGAACACTCAG-3’。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于RT-PCR扩增反应液中正向引物浓度为 0.40μmol/L、反向引物浓度为0.40μmol/L、寡核苷酸探针浓度为0.20μmol/L。

3.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于RT-PCR扩增反应液中耐热DNA聚合酶的浓度为 5U/反应。

4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于RT-PCR扩增反应液中逆转录酶的浓度为100U/ 反应。

5.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于RT-PCR扩增反应液中RNA酶抑制剂的浓度为 20U/反应。

6.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于RT-PCR扩增反应液中脱氧核糖核苷三磷酸 (dNTPs)的浓度为0.22mmol/L。

7.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于用于RT-PCR扩增的反应温度和时间为：40℃ 逆转录25min；然后94℃预变性3min；最后93℃15s，55℃45s，40个循环。

8.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于所检测的样品选自咽喉拭子、泄殖腔拭子、 肌肉或脏器样本、血清或血浆。