[发明专利]一种实时荧光RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种实时荧光RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒的试剂盒，特别是涉及以一步法 实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术早期、快速诊断H5亚型禽流感病毒感染的试 剂盒。本试剂盒具有很高的灵敏度和特异性，通过本发明的试剂盒实现对咽喉拭子、泄殖腔 拭子、肌肉或脏器样本、血清或血浆等样品中的H5亚型禽流感病毒进行快速早期检测和定量 分析。

背景技术

禽流感(Avian Influenza，AI)是禽流行性感冒的简称，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟，是 一种从呼吸道疾病到严重性全身组织出血性病变等多种症状的急性传染病。1878 年，Perroncito在意大利的鸡群中首次发现禽流感，其后在世界各地均有报道，每次暴发都造 成巨大的经济损失，如，1993年美国宾夕法尼亚州暴发禽流感，政府斥资6000万美元用于捕 杀1700万只鸡；1995年，因为禽流感原因，墨西哥捕杀、封锁约5000万只鸡，并对上亿只鸡 进行紧急接种疫苗，直接造成10亿美元经济损失。我国自从1994年发现禽流感在鸡群中流行 (金元昌，李景鹏，张龙等.禽流感病毒分子生物学研究进展.动物医学进展，2003，24 (1)：12-15)以来，已经发生多起暴发事件。禽流感给世界养禽业造成巨大损失，是国际公认 的一种禽类毁灭性传染病，国际兽医局动物流行病组织(IOE)规定该病为A类烈性传染病，我 国也将其列为一类检疫对象。

引起禽流感的致病元凶——禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)属于正粘病毒 科，A型(或甲型)流感病毒，是一种负链RNA病毒，根据其膜蛋白血凝素(Hemagglutinin， HA)抗原性可分成不同的亚型，迄今为止一共发现了16种HA亚型(H1～H16)，其中绝大数AIV 呈隐性感染，不表现任何临床症状，只有少数AIV具有迅速传播和高致死性的特征，称之为高 致病力禽流感病毒，如，AIV-H5、AIV-H7、AIV-H9。与其他RNA病毒一样，由于RNA聚合酶缺 乏校正功能，容易发生变异；更特别的是，流感病毒的基因组都是由非连续的、分节段的8 个RNA片段组成，容易发生重排，因此AIV-H5极易发生变异，毒力越来越强。近年来，高致病 性禽流感在世界各地的暴发成上升趋势，不但严重危害禽类，也威胁哺乳动物，尤其是可以 感染人类并可致死，特别是1997年香港暴发的禽流感，不但损失了1亿港币来捕杀150万只鸡， 而且已经对人类健康造成极大威胁，到目前，我国及其他国家已经发生数百人感染禽流感致 死的报道。由此可见，研究禽流感具有重要的公共卫生学意义和经济学意义！当前的重点是 预防和控制AIV-H5的传播，因此建立快速、准确的病毒检测手段至关重要。