[发明专利]一种鸡防御素-1基因真核表达质粒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种动物医药生物工程领域，特别是一种鸡防御素-1基因真核表达质粒及由该质粒制成的分子佐剂和疫苗。

背景技术

防御素是动物机体先天性内源免疫防御系统产生的一类对抗外源性病原微生物的阳离子肽类活性物质，是生物机体免疫防卫系统的一个重要组成部分。除抗菌活性外，防御素还可中和LPS（脂多糖）、促进伤口愈合，对单核细胞的趋化性，调理作用活性，免疫增强活性。

研究发现人防御素（HNP）能增强老鼠巨噬细胞的吞噬作用功能，兔子防御素在肺泡巨噬细胞中作为具有调理素作用。兔子、豚鼠α-防御素，与人HNP2一样，可以诱导激活肥大细胞脱粒作用，导致组氨与前列腺素（PGD₂）的释放。人HNP1-3能刺激气管上皮细胞增加IL-8基因的转录与产生，增加单核细胞产生TNF和IL-1，而降低IL-10的产生。人、兔的α-防御素通过竞争促肾上腺皮质激素的受体结合，具有抑制免疫抑制物糖皮质类固醇的产生能力。通过与固相或液相补体C1q的结合，体外人α-防御素能提高或抑制经典补体途径的激活。Tettito 等1989年及Murphy 等1993年的研究还证明人HNP-1-3具有对单核细胞的细胞趋化性与对上皮细胞和培养的成纤维细胞促有丝分裂活性。Yang 等人1999年和2000年研究表明，人上皮β-防御素（hBD-1和hBD-2）通过与CCR6化学激动受体的结合对未成熟树状突细胞和记忆性T-细胞具有趋化性；在毫摩尔浓度，hBD-1和hBD-2可以召集未成熟树状突细胞和记忆性T-细胞到微生物侵入的皮肤或粘膜位点，因此在内源免疫与获得性免疫反应中起重要作用。Chaly 等2000年的研究还表明人中性粒细胞α防御素通过影响细胞因子和粘附分子的表达来调节炎症反应。Biragyn et al（2001）对鼠β-防御素多肽-2,3的研究也发现它们可以与鼠CCR6化学激动受体的结合，类似于炎症化学激动剂MIP3-α，可以化学吸引骨髓来源的未成熟细胞，但对成熟的树突状细胞无用。Lillard 等1999年在进行防御素诱导增强机体获得性免疫力机制研究时发现，HNPs能显著增加血清中抗原特异性IgG与IgM的水平；增强抗原特异性CD4⁺T细胞的增值与IFN-γ、IL-5、IL-6、IL-10的分泌；体外研究发现CD4⁺T提高CD3ε刺激的脾脏与Peyer’s结CD4⁺T细胞的增值与T辅助细胞因子分泌；调节LPS或CD3ε刺激的脾脏与Peyer’s结B或T细胞群共刺激分子的表达。 Tani et al（2000）体外用人α-防御素刺激鼠脾脏细胞可以促进其增值和细胞因子的产生；体内喂给小鼠可以提高IgG₁、IgG_2a、IgG_2b抗体水平。

防御素还与内源防御的其他方面作用如急性炎症有关，包括：初始裂解细胞壁释放炎症刺激物，肥大细胞脱粒导致组胺释放及随后的血管缩张；增加中性粒细胞和T-辅助性细胞的化学趋化作用，导致白细胞聚集到感染位点；促进非特异性吞噬作用；通过组织纤维蛋白溶原酶激活剂抑制纤维蛋白溶解作用，这样减少细菌的传播；通过促进成纤维细胞的趋化和生长使组织、伤口的修复；通过抑制某些蛋白酶如Furin和组织蛋白酶抑制组织的损伤。假如急性炎症反应不足产生细菌的清除，那么长期炎症和适应性免疫反应就启动。有些防御素就在这个过程起作用：作为单核细胞的趋化因子；通过趋化因子招集T细胞；增强化学趋化作用产生和T-辅助细胞扩增反应，导致增加免疫球蛋白G，不是A的产生；抑制细胞因子的产生与其它巨噬细胞对LPS，LTA和细菌CpG DNA的反应；打开特异性吞噬细胞基因；刺激吞噬细胞凋亡和激活淋巴细胞，产生潜在的驱除感染细胞。

这些研究都表明防御素能直接调控内源免疫防御体系对抗外源侵病原微生物，在机体获得性免疫体系与先天性免疫体系中具有重要。椐研究，鸡防御素-1就具有诱导机体增强特异性与非特异性免疫反应能力性。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种具有防御素所特有的免疫增强作用的、适合鸡使用的鸡防御素-1基因真核表达质粒及由该质粒制成的分子佐剂和疫苗。