[发明专利]一种血管内皮细胞及其制备方法与应用

权利要求书

1.血管内皮细胞在体外抑制外周血单核细胞分化为树突状细胞中的应用；

所述血管内皮细胞按照如下方法分离：用II型胶原酶消化离体脐带的脐静脉，收集细胞，再进行培养，获得的贴壁细胞即为血管内皮细胞；

所述II型胶原酶与所述离体脐带的配比是85U-342U：1cm长脐带；所述消化的时间为10-30min；

用所述II型胶原酶的溶液进行消化，所述II型胶原酶溶液的初始浓度为171U/ml-684U/ml。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述II型胶原酶与所述离体脐带的配比为171U：1cm长脐带；所述消化的时间为10min。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：用所述II型胶原酶的溶液进行消化，所述II型胶原酶溶液的初始浓度为342U/ml。

4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述培养中使用的培养基是向IMDM培养基中添加马血清、胎牛血清、牛血清白蛋白、肝素钠、血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子，使马血清的终浓度为5-15％(体积百分含量)、胎牛血清的终浓度为5-15％(体积百分含量)、牛血清白蛋白的终浓度为0.5-2％(质量百分含量)、肝素钠的终浓度为10-20ug/ml、血管内皮生长因子的终浓度为5-20ng/ml、碱性成纤维生长因子的终浓度为1-5ng/ml，得到的培养基。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述马血清的终浓度为10％、所述胎牛血清的终浓度为10％、所述牛血清白蛋白的终浓度为1％、所述肝素钠的终浓度为10ug/ml、所述血管内皮生长因子的终浓度为10ng/ml、所述碱性成纤维生长因子的终浓度为1ng/ml。

6.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述培养的温度为35-38℃、CO₂浓度为5-8％(体积百分含量)、湿度为饱和湿度、培养时间是3-4天。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述培养的温度为37℃、所述CO₂浓度为5％。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述培养从开始起进行24h后，换一次新鲜的所述培养基。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述培养还包括继代培养。