[发明专利]一种H5亚型禽流感病毒检测试剂盒及其应用

权利要求书

1、一种H5亚型禽流感病毒检测试剂盒，包括三对引物，一对引物是与禽流感H5N1病毒GenBank Accession Number AY653200中HA基因结合的内侧引物对，一对引物是与禽流感H5N1病毒GenBank Accession Number AY653200中HA基因结合的外侧引物对，一对引物是与禽流感H5N1病毒GenBank Accession Number AY653200中HA基因结合的环形引物对；所述内侧引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列是序列表中的序列4，下游引物的核苷酸序列是序列表中的序列5；所述外侧引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列是序列表中的序列2，下游引物的核苷酸序列是序列表中的序列3；所述环形引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列是序列表中的序列6，下游引物的核苷酸序列是序列表中的序列7。

2、如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括环介导等温扩增试剂、阳性对照、阴性对照；所述阳性对照为H5亚型禽流感病毒RNA。

3、如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述环介导等温扩增试剂为含有如下溶质的水溶液：Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、Tween20、MgSO₄、甜菜碱、脱氧核苷酸、Bst DNA聚合酶和AMV反转录酶。

4、如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：在所述环介导等温扩增试剂中加入所述内侧引物对、所述外侧引物对及所述环形引物对，形成环介导等温扩增反应液；每23μL所述环介导等温扩增反应液中，所述溶质的物质的量如下：

Tris-HCl 0.5μmol、KCl 0.25μmol、(NH₄)₂SO₄ 0.25μmol、Tween20 0.025μL、MgSO₄ 0.2μmol、甜菜碱20μmol、4种脱氧核苷酸各0.035μmol、Bst DNA聚合酶16U、AMV反转录酶0.2U，所述内侧引物对的上游引物和下游引物各0.04-0.06μmol，所述外侧引物对的上游引物和下游引物各0.004-0.008μmol，所述环形引物对的上游引物和下游引物各0.02-0.04μmol。

5、如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：每23μL所述环介导等温扩增反应液中，所述内侧引物对的上游引物和下游引物各0.04μmol，所述外侧引物对的上游引物和下游引物各0.004μmol，所述环形引物对的上游引物和下游引物各0.02μmol。

6、如权利要求1至5中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括荧光显色剂。

7、如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光显色剂为荧光染料SYBRGREEN I。

8、如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述环介导等温扩增反应液与所述荧光显色剂的体积比为23∶(1-3)。

9、如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述环介导等温扩增反应液与所述荧光显色剂的体积比为23∶1。