[发明专利]一种检测三聚氰胺的方法及其专用酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒，包括半抗原和三聚氰胺的特异性抗 体；所述特异性抗体为所述三聚氰胺的单克隆抗体；所述半抗原的结构式如下：

所述单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.2716的对三聚氰胺药物单克隆杂 交瘤细胞株C-3-4分泌产生的抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述半抗原和三聚氰胺的特

异性抗体以下述任一种形式存在：

1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原与载体蛋白的偶联物，将 其作为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述特异性抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括抗抗体； 所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体；

所述半抗原和抗抗体以下述任一种形式存在：

1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原与载体蛋白的偶联物，将 其作为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述抗抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括三 聚氰胺标准品溶液、显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液；

所述浓缩洗涤液为pH值为7.8-8.5、含有在所述浓缩洗涤液中的质量终浓度为 0.02-0.05％叠氮化钠、在所述浓缩洗涤液中的质量终浓度为1.0-2.0％吐温-20、 0.1-0.3mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有在所述浓缩复溶液中的质量 终浓度为5-10％的DMSO、pH为6.5-6.7、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标记中所用的标 记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述显色 液由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液为过氧化氢或过氧化脲，显色液 B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1-2mol/L硫酸或盐酸溶液；当标记酶为 碱性磷酸酯酶时，显色剂为硝基磷酸盐缓冲液，终止液为1-2mol/L氢氧化钠溶液。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为pH值为8.2、 含有在所述浓缩洗涤液中的质量终浓度为0.03％的叠氮化钠、在所述浓缩洗涤液中 的质量终浓度为2.0％的吐温-20、0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液为含有在 所述浓缩复溶液中的质量终浓度为8％的DMSO、pH为6.6、0.2mol/L磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述底物显色液A液为过氧化 脲，所述底物显色液B液为四甲基联苯胺；所述终止液为2mol/L的盐酸。

8.一种检测三聚氰胺的方法，包括以下步骤：

1)样品前处理

当所述样品为牛奶样品时，所述样品前处理方法为：将浓缩复溶液与牛奶混匀， 其中所述牛奶与所述浓缩复溶液的体积比为1∶8-10，取所述混匀后的样品用于分 析；

当所述样品为奶粉样品时，所述样品前处理方法为：用醋酸缓冲液超声溶解奶 粉，其中所述醋酸缓冲液与所述奶粉的配比为4-6ml∶0.5-1.5g，离心取上清液，将 所述上清液以1∶8-10的体积比与浓缩复溶液混匀，取样用于分析；

当所述样品为饲料时，所述样品前处理方法为：将乙腈与饲料混匀，其中所述 乙腈与所述饲料的配比为8-12ml∶0.5-1.5g，然后超声提取8-15min，离心取上清液； 再将所述上清液吹干，加入正己烷，混匀，再加入浓缩复溶液，其中所述上清液、 所述正己烷与所述浓缩复溶液的体积比为1∶1∶1，离心取下层水相；将所述下层 水相与所述浓缩复溶液以1∶8-10的体积比混匀，取样用于分析；

2)利用权利要求1-6中任一所述的酶联免疫试剂盒检测1)中所得到的样品。