[发明专利]一种检测三聚氰胺的方法及其专用酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测三聚氰胺的方法及其专用酶联免疫试剂盒。

背景技术

三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，其结构式如图1所示。其含氮量 高达66％，白色单晶斜晶体，无味。因其易于购买和生产，成本低，固有不法厂商 针对凯氏定氮法的不足，将其添加于食品和饲料中以提高蛋白含量，获取利益。虽 然三聚氰胺属于低毒性化合物，但其在动物体内会代谢为三聚氰酸，三聚氰胺与三 聚氰酸发生反应并累积，可引起膀胱结石和泌尿道病变。膀胱结石长期刺激，可出 现膀胱肿瘤。因此，在实践中有必要建立一种精确度高、灵敏度高的检测三聚氰胺 的方法。

目前，三聚氰胺残留量的常规检测方法主要有液相色谱/质谱法(LC/MS)、 高效液相色谱(HPLC)、液相色谱串联质谱(LC/MSMS)等，但是这些方法存在 着仪器设备复杂、检测过程繁琐和对检验人员的技能要求高的缺点，不适合现场监 控和大量样品的筛查。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测三聚氰胺的酶联免疫试剂盒，包括半抗原和三聚氰胺的特 异性抗体；所述特异性抗体为所述三聚氰胺的多克隆抗体或单克隆抗体；所述半抗 原的结构式如下：

其中，所述半抗原和三聚氰胺的特异性抗体可以以下述任一种形式存在：

1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原与载体蛋白的偶联物，将 其作为包被原，所述特异性抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述特异性抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述试剂盒还可以既包括半抗原和三聚氰胺的特异性抗体又包括抗抗体；所述 抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；其中，所述半抗原和抗抗体以下述任一种 形式存在：

1)将所述半抗原与载体蛋白进行偶联，得到半抗原与载体蛋白的偶联物，将 其作为包被原，所述抗抗体进行酶标记后作为酶标记物；

2)所述抗抗体为包被原，所述半抗原进行酶标记后作为酶标记物。

所述三聚氰胺多克隆抗体或三聚氰胺单克隆抗体，均是用所述三聚氰胺半抗原 与载体蛋白的偶联物作为免疫原得到的；所述载体蛋白可为甲状腺蛋白、鼠血清蛋 白、人血清蛋白、牛血清蛋白、兔血清蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白等。

所述单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.2716的对三聚氰胺药物单克隆杂交 瘤细胞株C-3-4分泌产生的抗体。

所述三聚氰胺多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括三聚氰胺标准品溶 液、显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液；

其中，所述浓缩洗涤液可以为pH值为7.8-8.5、含有在所述浓缩洗涤液中的终 浓度为0.02-0.05％叠氮化钠、在所述浓缩洗涤液中的终浓度为1.0-2.0％吐温-20、 0.1-0.3mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩复溶液可以为含有在所述浓缩复溶液中的 终浓度为5-10％的DMSO、pH为6.5-6.7、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。上述百分 含量为质量百分含量。

所述酶标记中所用的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；当标记酶为辣 根过氧化物酶时，所述显色液由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液为过 氧化氢或过氧化脲，显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1-2mol/L 硫酸或盐酸溶液；当标记酶为碱性磷酸酯酶时，显色剂为硝基磷酸盐缓冲液，终止 液为1-2mol/L氢氧化钠溶液。

所述浓缩洗涤液具体可以为pH值为8.2、含有在所述浓缩洗涤液中的终浓度为 0.03％叠氮化钠、在所述浓缩洗涤液中的终浓度为2.0％的吐温-20、0.2mol/L磷酸 盐缓冲液；所述浓缩复溶液具体可以为含有在所述浓缩复溶液中的终浓度为8％的 DMSO、pH为6.6、0.2mol/L磷酸盐缓冲液；所述底物显色液A液为过氧化脲，所 述底物显色液B液为四甲基联苯胺；所述终止液为2mol/L的盐酸。所述百分含量 为质量百分含量。