[发明专利]一种高效基因克隆方法无效
| 申请号： | 200810231368.3 | 申请日： | 2008-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN101649315A | 公开（公告）日： | 2010-02-17 |
| 发明（设计）人： | 张建云;谷立坤;崔树军;卢敦华;廉有轩;金维平;吴烨;何晶亮;史丹;范玲 | 申请（专利权）人： | 河南工程学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/31;C12N15/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 451191河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 基因 克隆 方法 | ||
【权利要求书】：
1.基因克隆的高效方法，其特征在于选择pUC18(pUC19)质粒及其衍生质粒作为载体，采用Sal I酶切完全，产生5’端突出3个碱基的粘性末端
5’ATGCCTGCAGG 3’
3’TACGGACGTCCAGCT 5’
载体完全酶切后用Klenow酶补加碱基T、C、G，使载体片段末端5’端突出碱基T
5’ATGCCTGCAGGTCG 3’
3’TACGGACGTCCAGCT 5’
细菌基因组DNA采用限制性内切酶酶切或超声波酶切方法，断裂成DNA片段长度小于10kb的片段。细菌基因组DNA片段，PCR产物用Taq酶补平并在3’端加碱基A。恰好与用上述方法修饰过的载体与通过A-T碱基末端互补而连接起来，经过转化大肠杆菌后蓝白斑互补筛选克隆基因。
2.根据权利要求1所述的克隆方法，其特征在于该方法用于构建基因组文库，克隆各种DNA聚合酶扩增的PCR产物，或者任何长度小于10kb的DNA片段。
3权利要求1所述的克隆方法中采用的质粒，其特征在于pUC18(pUC19)质粒及其衍生质粒。
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