[发明专利]一种通过NOS3基因拷贝数预测高原肺水肿发病风险的试剂盒

权利要求书

1.一种通过NOS3基因拷贝数预测高肺水肿发病风险的试剂盒，包括分离包装的NOS3引物混合液，Beta-actin引物混合液，PCR反应液，无菌去离子水，定值标准品，健康对照DNA，其特征是，

所述的NOS3引物混合液中的上游引物和下游引物的序列为：

F：5′-TGTCCAGAGGCTGCAAGG-3′和R：5′-AAGAAACAGGAAGCGGGTG-3′；

所述的Beta-act in引物混合液中的上游引物和下游引物的序列为：

F：5’-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3’和R：5’-GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’；

所述的PCR反应液，含有PCR缓冲液、MgCl₂、dNTPs、SYBR染料、Ex Taq酶；

所述的定值标准品是用Beta-act in的上下游引物在PTC-200PCR仪中进行目的片段的扩增，得到含有目的片段的PCR产物，然后，将目的片段插入克隆载体pMD18-T中，并将阳性克隆增菌后测序验证；从证实含Beta-actin基因片段的菌液中提取质粒；

所述的健康对照DNA是采集拟进入高原前的人员的静脉血2ml，并且到高原后在一周内没有发生高原肺水肿，然后，提取血液白细胞DNA，再将DNA浓度调为50ng/μl。

2.根据权利要求1所述的一种通过NOS3基因拷贝数预测高肺水肿发病风险的试剂盒，其特征是，所述的NOS 3引物混合液为100μl；其中上游引物和下游引物各50μl，浓度均为10pmol/μl。

3.根据权利要求1所述的一种通过NOS3基因拷贝数预测高肺水肿发病风险的试剂盒，其特征是，所述的Beta-actin引物混合液为400μl；其中上游引物和下游引物各200μl，浓度均为10pmol/μl。

4.根据权利要求1所述的一种通过NOS 3基因拷贝数预测高肺水肿发病风险的试剂盒，其特征是所述的定值标准品用无菌去离子水倍比稀释为5管，每管体积200μl，浓度分别为1×10⁴、1×10⁵、1×10⁶、1×10⁷、1×10⁸拷贝/μl。

5.根据权利要求1所述的一种通过NOS3基因拷贝数预测高肺水肿发病风险的试剂盒，其特征是，所述的无菌去离子水为1500μl。