[发明专利]硫酸酯化多糖中硫酸基的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的测定方法，属于化学分析方法领域。

技术背景

含有硫酸集团的糖复合物(glycoconjugates)，如糖蛋白(glycoprotein)、肽聚糖 (peptidoglycans)、蛋白聚糖(proteoglycan)以及硫酸酯化多糖(sulfated polysaccharides，SPS)是一大类重要的生物活性物质。具有抗凝血、活血化瘀、调节血 脂、抗肿瘤、抗病毒、增强细胞免疫和体液免疫功能、抗衰老、对机体细胞的保护等作用。

该类多糖的重要特征就是含有硫酸基，为多糖大分子链中单糖残基的某一羟基被硫酸 基所取代。许多生物活性功能除与多糖结构、水溶性、分子量大小等有关外，与硫酸基的 含量有着直接的联系。如藻酸硫酸化后具有抗凝血作用，含硫量为5.15％，具有强的类似 肝素的阻凝作用；当硫量达17％，呈现显著的抗凝血作用；硫酸盐阴离子对硫酸酯化多糖抑 制HIV是必须的离子结构，其抑制作用不仅与浓度呈量效关系，而且与分子中硫酸基含量 有关，含量越高，其抗HIV的作用越强，显然硫酸基在抑制HIV的生长过程中起了重要作 用。

目前多糖中硫酸基常用的测定方法有灰分法、盐酸水解—硫酸钡法、硫酸钡浊度法、 联苯胺法等。在这些方法中前两种属常量分析，后两种为微量分析。如硫酸钡浊度法，称 样量为1～3mg，还要经水解等一系列样品处理，其绝对误差和相对误差大在所难免。而灰 分法和盐酸水解—硫酸钡重量法报道叙述不具体、不规范，且两种方法测定结果相差甚远。

发明内容

本发明目的在于提供一种可靠的硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的测定方法，对硫酸 酯化多糖及相关食品、功能食品、药品中硫酸基的测定方法进行统一、规范操作程序，使 其分析方法具有可比性。

上述目的是这样实现的：硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基含量的测定方法，测定步骤如 下：

1)称取待测样品0.1～0.4克(精确至0.0001克)，置于20ml带盖玻璃瓶中，用少 许去离子水润湿，加入摩尔浓度为0.5～1.8mol/L的HCl溶液5～18ml，拧紧瓶盖，在旋 涡混合器上充分混匀，在超级微量恒温器上，于50～100℃下加热水解1～12小时，在水 解过程中，间歇有规律地摇动小瓶。

2)取出玻璃瓶并冷却至室温，以慢速定性滤纸过滤，用去离子水洗涤残渣至无SO₄^2-(以2mol/L BaCl₂溶液检验，滤液收集约200ml)，搅拌下徐徐加入2mol/L BaCl₂溶液5ml， 并加入2mol/L HNO₃溶液5ml，温和加热30分钟，取下静置4小时。

3)用慢速定量滤纸过滤；再用去离子水洗至无Cl^-(1％AgNO₃溶液检验)，将滤纸及沉 淀物转移至已在650～850℃恒重并称重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化，注意不能让其燃烧， 然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，650～850℃加热1小时；取出室温冷却5分钟， 放入装有CaCl₂的干燥器中，冷至室温，称量记录；再在650～850℃加热0.5小时，冷却， 称量记录；重复上述操作，直至二次称量相差不大于0.0002克。

4)然后计算SO₄^2-的含量。

本方法测定结果可靠，精密度、准确度好，而且所用设备仪器简单，试剂易购，适用 于一般实验室质量控制，仲裁分析，以及含硫酸酯化多糖的食品、保健食品、药品中硫酸 基常量分析。

具体实施方式

硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的测定方法，下面通过举例作进一步详细说明。

实施例1：