[发明专利]一种高纯度谷胱甘肽的生产方法有效
申请号: | 200810233835.6 | 申请日: | 2008-12-14 |
公开(公告)号: | CN101429229A | 公开(公告)日: | 2009-05-13 |
发明(设计)人: | 孙永龙;张会翔;张伟波 | 申请(专利权)人: | 甘肃正生生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K5/037 | 分类号: | C07K5/037;C07K1/36;C07K1/18 |
代理公司: | 甘肃省知识产权事务中心 | 代理人: | 田玉兰 |
地址: | 730900甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 纯度 谷胱甘肽 生产 方法 | ||
1.一种高纯度谷胱甘肽的生产方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
(1)发酵液离心:将发酵水平至少达到1650mg/L的谷胱甘肽发酵液下罐后离心,离心转速为3000~5000rpm,时间为5~10min,得到湿酵母细胞体;
(2)热水破壁:将1份湿酵母细胞体加入到6~10份沸水的抽提罐中,进行搅拌,搅拌转速为300~350rpm,当抽提液温度达到85~95℃时,保温10~15分钟后,停止抽提,将抽提液倒出,将抽提液水浴冷却至室温;
(3)抽提液离心:将抽提液离心,离心转速为3000~5000rpm,时间为5~10min,除去酵母渣,得到含有GSH的抽提液;
(4)调节pH:在离心后的抽提液中加入酸,使料液体系处于pH 2.5~3.5的酸性环境中,可沉淀某些杂质,并使GSH处于稳定状态,防止氧化;
(5)微滤:利用0.1~1μm孔径的微滤设备对调节pH后的抽提液进行过滤,以除去悬浮的小颗粒杂质,得到清亮透明的滤液;
(6)阳离子树脂分离:将微滤后的料液在酸性环境的磺酸基团阳离子树脂上进行吸附,使GSH被吸附,然后用氯化钠或盐酸溶液解析,得到富含GSH的液体;
(7)吸附树脂分离:将经过阳离子交换树脂分离纯化后的富含GSH的液体在苯乙烯系弱极性大孔吸附树脂上再次进行吸附,然后用纯水洗脱,得到纯度很高的GSH液体;
(8)减压浓缩:在-0.07~-0.098Mpa的真空度与55~65℃温度下减压浓缩GSH溶液,使达到GSH含量在400mg/ml以上;
(9)结晶:在谷胱甘肽浓缩液中加入异丙醇或乙醇,使有机溶剂含量达到60%~80%,调pH值至2.90~3.0,在0~4℃环境进行结晶;
(10)洗晶:用体积百分比浓度为70%~90%的丙酮溶液对结晶体进行洗涤;
(11)真空干燥:在-0.07~-0.098Mpa的真空度下干燥,得到98%以上纯度的GSH。
2.根据权利要求1所述的高纯度谷胱甘肽的生产方法,其特征在于该方法步骤(4)中,用于调节pH的酸选用盐酸、硫酸或硝酸。
3.根据权利要求1所述的高纯度谷胱甘肽的生产方法,其特征在于该方法步骤(7)得到的GSH液体,先用截留分子量100~200的纳滤膜浓缩,以提高GSH的浓度并去除小分子杂质,再进行步骤(8)的减压浓缩。
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