[发明专利]溴氰菊酯抗原、抗体及其应用

权利要求书

1.溴氰菊酯人工半抗原，其特征在于它的分子结构式为：

1-羧基-(3′-苯氧基苯基)甲基-3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基羧酸酯Med或

N-2-(羧基丙基)氨甲酰基-(3′-苯氧基苯基)甲基-3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基羧酸酯Di

2.权利要求1所述溴氰菊酯人工半抗原的制备方法，其特征在于，

人工半抗原1-羧基-(3′-苯氧基苯基)甲基-3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基羧酸酯Med的制备步骤如下：

1)取0.5～5g氰醇于100mL三口烧瓶中，加入5～15mL浓盐酸，50～70℃磁力搅拌反应2h；

2)反应后的混合液用乙醚萃取；

3)乙醚层再用水洗，上层过无水Na₂SO₄，浓缩近干，得氰酸的粗产物；

4)柱层析法纯化，石油醚湿法装柱，收集洗脱液为丙酮的洗脱相，浓缩近干得无色晶体；

5)称取0.5-5g二溴菊酸于100mL三口烧瓶，加入5-15mL氯化亚砜，搅拌回流2h，浓缩，得黄色液体3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基酰氯，用15mL THF溶解；

6)于100mL三口烧瓶中加入0.5-5g氰酸搅拌，用2mol/L NaOH溶解，将上述酰氯加入，冰浴下搅拌反应4h；

7)用乙酸乙酯提取产物，调节pH值至2.0，水洗，无水MgSO₄干燥，减压浓缩得到Med粗产物；

8)柱层析法纯化，用乙酸乙酯：石油醚(10：90→100：0)淋洗，浓缩得到黄色的Med产物。人工半抗原N-2-(羧基丙基)氨甲酰基-(3′-苯氧基苯基)甲基-3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基羧酸酯Di的制备步骤如下：

1)称取0.5-5g Med于100mL三口烧瓶中，加入10mL氯化亚砜，搅拌回流2h；

2)减压浓缩，得黄色油状液体，用15mLTHF溶解并在4℃下冷却；

3)称取0.5-5g4-氨基丁酸于100mL三口烧瓶中，加入5mL的4mol/L NaOH溶液，冰浴下搅拌。

4)分5次加入酰氯的THF溶液，每次间隔10min，在后4次加料的同时加2mL4mol/L NaOH加液完毕继续反应3h。

5)用浓HCl调节反应液的pH值至2.0，用乙酸乙酯萃取，水洗，无水MgSO₄干燥，减压浓缩，得到黄色的油状物。

6)薄层层析纯化(展开剂为：乙酸乙酯：石油醚：乙酸(30：79.5：0.5))，浓缩得到黄色Di产物。

3.一种溴氰菊酯抗原，其特征在于，分别由权利要求1或2所述的半抗原N-2-(羧基丙基)氨甲酰基-(3′-苯氧基苯基)甲基-3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基羧酸酯Di与蛋白质偶联、1-羧基-(3′-苯氧基苯基)甲基-3-(2′，2′-二溴乙烯基)-2，2-二甲基环丙基羧酸酯Med与蛋白质偶联而成，其分子结构式为：

或

     免疫原Di-BSA                 包被抗原Med-OVA

4.用权利要求3所述溴氰菊酯抗原制备的溴氰菊酯特异性抗体。

5.权利要求4所述溴氰菊酯特异性抗体在检测食品、农产品和环境样品中溴氰菊酯的残留量中的应用。