[发明专利]一种棉花花粉发育过程中细胞DNA的荧光标记方法无效
申请号: | 200810234566.5 | 申请日: | 2008-11-21 |
公开(公告)号: | CN101413033A | 公开(公告)日: | 2009-04-22 |
发明(设计)人: | 唐灿明;岳洁瑜;吴李君;吴跃进 | 申请(专利权)人: | 南京农业大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;G01N21/64 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司 | 代理人: | 张素卿 |
地址: | 21009*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 棉花 花粉 发育 过程 细胞 dna 荧光 标记 方法 | ||
1.一种棉花花粉发育过程中细胞DNA的荧光标记方法,包括以下步骤:
1)晴天早晨6-7点间摘取棉花花蕾,剥去苞叶,固定于无水乙醇∶冰醋酸配成体积比3∶1的卡诺氏固定液,12-24h后转入体积比为70%的乙醇中,保存于4℃冰箱;
2)固定好的样品经体积浓度为50%、30%、10%的乙醇逐级下行至蒸馏水,每级停留2h;
3)直径小于7mm的花蕾,用解剖针剥离出其中的花粉母细胞,置于体积比0.1-0.2%的甘油中渗透2-3h;用pH7-8的磷酸缓冲液洗涤花粉母细胞,将花粉母细胞用0.5-1μg/ml的DAPI避光染色1-2h,细胞内DNA物质被荧光标记;
4)直径大于7mm的花蕾,用镊子剥离出其中的成熟花粉粒,加入质量体积比10%的次氯酸钠水溶液,室温振荡放置10min,再于60℃水浴处理10min;用pH 7-8的磷酸缓冲液洗涤花粉粒;花粉粒置于体积比0.1-0.2%的甘油中渗透2-3h;用pH7-8的磷酸缓冲液洗涤花粉粒;再将花粉粒移至载玻片,加入100-200μL浓度为2μg/ml的DAPI溶液,盖片,用力斜压至外壁脱掉而花粉粒细胞不破裂为度,放在暗盒中静置10min后镜检,细胞内DNA物质被荧光标记。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述棉花为陆地棉。
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