[发明专利]一种全氟辛酸的酶联免疫检测方法

权利要求书

1.一种全氟辛酸的酶联免疫检测方法，其特征在于利用合成的全氟辛酸免 疫原免疫得到多克隆抗体，以全氟辛酸为标准品，以全氟辛酸半抗原与OVA的 偶联物作为包被抗原，建立全氟辛酸的间接竞争酶联免疫检测方法；步骤如下：

(1)以0.05M的碳酸盐缓冲溶液稀释包被抗原1∶5000～1∶8000，加入酶 标板中，每孔100μL，4℃孵育过夜，然后用含0.1％明胶的上述碳酸盐缓冲液 作为封闭液，封闭2h；

(2)用PBS将全氟辛酸标准品稀释成0.01，0.1，0.5，1，5，10，20ng/mL 系列浓度，将上述稀释后的标准品及处理好的样品，分别加入到各自的酶标孔 中，加50μL/孔；将多克隆抗体以抗体稀释液梯度稀释，然后每孔加入50μL 稀释好的多克隆抗体，于37℃温育1h，然后以PBST洗涤液洗涤3～5次；

(3)将辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR-HRP用抗体稀释液以 1∶3000～1∶5000进行稀释，然后每孔加入100μL，37℃作用1h后以PBST洗涤 液洗涤3～5次；

(4)每孔加入显色液100μL，37℃显色15min；加入终止液2M硫酸溶 液，每孔100μL；酶标仪450nm测吸光值A₄₅₀，与根据标准品制备的标准曲 线对比算出待测样品的全氟辛酸含量；

所述合成的全氟辛酸免疫原是通过碳二亚胺法将全氟辛酸半抗原与牛血清 白蛋白BSA偶联获得的偶联物。