[发明专利]迷迭香酸在大肠杆菌L-天冬酰胺酶激活剂中的应用无效
| 申请号： | 200810237783.X | 申请日： | 2008-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN101423827A | 公开（公告）日： | 2009-05-06 |
| 发明（设计）人： | 邵楠;李荣贵 | 申请（专利权）人： | 邵楠;青岛大学 |
| 主分类号： | C12N9/82 | 分类号： | C12N9/82;C12R1/19 |
| 代理公司： | 青岛高晓专利事务所 | 代理人： | 隋臻玮 |
| 地址： | 266071山东省青岛市市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 迷迭香酸 大肠杆菌 天冬 酰胺酶 激活剂 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.迷迭香酸作为大肠杆菌L-天冬酰胺酶激活剂的应用，其特征在于首先从大肠杆菌制备L-天冬酰胺酶提取液；在L-天冬酰胺酶活性测定体系中分别加入TE缓冲液以及不同浓度的迷迭香酸和L-天冬酰胺，45℃水浴加热，用20％三氯乙酸终止反应；反应体系离心后加AB-8大孔树脂悬浮液，充分振荡后离心以去除溶液中的迷迭香酸，分别取上清于蒸馏水中，加Nessler试剂，振荡使之充分混匀后于395nm处测定吸光度，测定酶促反应速度；计算每个迷迭香酸浓度下的米氏常数，迷迭香酸浓度为0.375×10-4～3.0×10-4g/ml时可显著提高体系中L-天冬酰胺酶活性，降低大肠杆菌L-天冬酰胺酶催化L-天冬酰胺分解反应的米氏常数值，提高反应速度。
2.根据权利要求1所述的迷迭香酸作为大肠杆菌L-天冬酰胺酶激活剂的应用，其特征在于L-天冬酰胺酶的来源是大肠杆菌：将活化好的大肠杆菌接种入LB培养液中37℃过夜培养；将培养物在4℃条件下离心，收集菌体细胞；TE缓冲液洗涤沉淀，离心去上清；TE缓冲液悬浮细胞，超声破碎；在4℃条件下离心，得上清液L-天冬酰胺酶提取液。
3.根据权利要求1或2所述的迷迭香酸作为大肠杆菌L-天冬酰胺酶激活剂的应用，其特征在于TE缓冲液是50mmol/LTris·Cl，1mmol/L EDTA，pH7.4。
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