[发明专利]鸭肝炎Ⅰ型病毒间接血凝诊断抗原的制备及试剂盒

权利要求书

1.一种鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)双醛化绵羊红细胞的制备：

取质量百分比浓度为8％绵羊红细胞悬液1重量份，边搅拌边滴加质量百分浓度为3％丙酮醛1重量份，24～26℃搅拌反应15～18小时，3000r/min离心15～20分钟，弃上清，红细胞用PBS溶液洗涤，用PBS溶液配制成质量百分比浓度为8％的红细胞悬液；

取上述红细胞悬液1重量份，边搅拌边滴加质量百分浓度比为3％甲醛溶液1重量份，24～26℃搅拌15～18小时，3000r/min离心15～20分钟，取红细胞用PBS溶液洗涤，用PBS溶液配制成质量百分比含量为8％的红细胞悬液，每100毫升质量百分比含量为8％的红细胞悬液中添加0.2克的叠氮钠；

(2)双醛化红细胞的鞣酸化

取质量百分比含量为8％的双醛化红细胞40毫升，用pH7.0，0.01mol/LPBS溶液洗涤，加入体积为质量百分比含量为8％的双醛化红细胞溶液的5倍的pH7.0，0.01mol/L PBS溶液，混匀后搅拌，加热至37℃，加入体积为质量百分比含量为8％的双醛化红细胞溶液1.25倍的质量体积比为0.01％的鞣酸溶液，全部加完后搅拌30～60分钟，离心，弃上清，红细胞泥用0.15mol/L，pH 6.4的PBS洗涤，离心后在沉淀物内加入体积为质量百分比含量为8％的双醛化红细胞溶液的3.925倍的0.15mol/L，pH 6.4的PBS即为2％的双醛化鞣酸化红细胞；

(3)鸭肝炎I型病毒抗原致敏双醛化鞣酸化绵羊红细胞：

将鸭肝炎I型病毒抗原贮存液用0.15mol/L、pH为6.4的PBS溶液稀释10倍，将稀释后的鸭肝炎I型病毒抗原溶液加入2倍体积的质量百分比浓度为8％双醛化鞣酸化红细胞悬液，充分混合，37℃水浴致敏60～90分钟，1500r/min离心10～15分钟，沉淀加3倍体积的质量百分比浓度为0.25％的血清白蛋白悬浮，37℃水浴30～60min，1500r/min离心10～15min，沉淀用 0.15mol/L、pH为6.4的PBS溶液洗涤，加入体积为鸭肝炎I型病毒抗原储存液160倍的0.01mol/L、pH为7.0的PBS溶液，即成鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原。

2.一种如权利要求1所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中绵羊红细胞悬液的制备方法为：在1重量份的健康青年公绵羊血中加入阿氏液1～1.2重量份，混匀，1～4℃存放3～5d后过滤；过滤后的血液每重量份中加入生理盐水9重量份，混匀，1000r/min离心10～15分钟，取红细胞加入9倍重量的生理盐水洗涤，用含有质量百分比含量为0.85％氯化钠、pH值为7.2的PBS溶液配成重量百分比为8％红细胞悬液。

3.一种如权利要求1所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中采用的PBS溶液为含氯化钠质量百分比含量0.85％、pH值为7.2的PBS溶液。

4.一种如权利要求1所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中加入丙酮醛溶液后25℃搅拌16小时，加入甲醛溶液后25℃搅拌16小时。

5.一种如权利要求1所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中鞣酸采用pH7.0，0.01mol/L的PBS溶液配制。

6.一种如权利要求1所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中鸭肝炎I型病毒抗原贮存液的制备方法为：取对10日龄鸭胚的半数致死量为10^8.5/0.2ml的鸭肝炎I型病毒溶液，加入体积为鸭肝炎I型病毒溶液0.1％的质量百分比含量为37％的甲醛溶液37℃灭活24小时，透析，待鸭肝炎I型病毒抗原溶液的体积浓缩为原体积的1/5时，即为鸭肝炎I型病毒抗原贮存液。

7.一种如权利要求6所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特征在于，透析采用聚乙二醇-10000的透析袋。

8.一种如权利要求1所述的鸭肝炎I型病毒间接血凝诊断抗原的制备方法，其特 征在于，在进行鞣酸化之前对双醛化绵羊红细胞进行自凝性检测，其方法为：在血凝板上任选3孔，分别滴入0.01mol/L pH7.0PBS溶液、4倍稀释的鸭肝炎I型病毒阴性血清和鸭肝炎I型病毒阳性血清各-50μl；取双醛化的绵羊红细胞0.1ml加0.01mol/L和pH7.0的PBS溶液0.9ml混匀，在上述三个孔中分别滴加25μl，混匀，盖上玻片室温下放置2小时观察红细胞是否凝集。