[发明专利]培养转基因兔成体成纤维细胞克隆胚胎的方法

权利要求书

1、培养转基因兔克隆胚胎的方法，包括以下步骤：将转入目的基因的兔成体成纤维细胞与去核的兔卵母细胞融合，得到重构复合体，获得克隆胚胎。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中，还包括激活所述重构复合体。

3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：激活所述重构复合体包括如下步骤：

1)用3000-3500V/cm直流电，电击15-20us，电击三次，每次间隔一秒；

2)电极后用4-6ug/mL放线菌酮和1-3mM6-二叔甲基氨基嘌呤处理0.5-1.5h。

4、根据权利要求3所述的方法，其特征在于：激活所述重构复合体包括如下步骤：

1)用3000V/cm直流电，电击20us，电击三次，每次间隔一秒；

2)电极后用5ug/mL放线菌酮和2mM 6-二叔甲基氨基嘌呤处理1h。

5、根据权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述转入目的基因的兔成体成纤维细胞是通过如下方法获得：培养兔成体成纤维细胞，所述兔成体成纤维细胞传代培养至3-13代后，将含有目的基因的质粒导入所述兔成体成纤维细胞，获得转入目的基因的兔成体成纤维细胞。

6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述去核的兔卵母细胞是按照如下方法获得的：

1)在成年母兔注射HCG 13-15h小时后取卵丘卵母细胞复合体；

2)所述卵丘卵母细胞复合体用50-100IU/ml透明质酸酶消化，然后去除卵丘细胞，获得卵母细胞；

3)采用spindleview(纺缍体观测)系统去除所述卵母细胞的细胞核，获得去核的兔卵母细胞。

7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述去核的兔卵母细胞是按照如下方法获得的：

1)在成年母兔注射HCG 14h小时后取卵丘卵母细胞复合体；

2)所述卵丘卵母细胞复合体用100IU/ml透明质酸酶消化，然后去除卵丘细胞，获得卵母细胞；

3)采用spindleview系统去除所述卵母细胞的细胞核，获得去核的兔卵母细胞。