[发明专利]一种利用肿瘤细胞生产生物活性产物的方法无效
| 申请号： | 200810242891.6 | 申请日： | 2008-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN101451151A | 公开（公告）日： | 2009-06-10 |
| 发明（设计）人： | 成勇 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/20;A01K67/027;C07K14/47 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 肿瘤 细胞 生产 生物 活性 产物 方法 | ||
1、一种利用肿瘤细胞生产生物活性产物的方法，包括以下步骤：
(1)构建含有5′核心序列-功能基因-3′核心序列-NEOr基因构件的表达载体，该载体可在杂交瘤细胞中高效表达，所说的5′核心序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，其中SEQ ID NO.2位于SEQ ID NO.1上游，3′核心序列如SEQ ID NO.3所示；
(2)分离上述(1)构建的表达载体中的基因构件，制备转基因小鼠或大鼠，从转基因鼠后代成体中分离得到转基因淋巴细胞、成纤维细胞或乳腺上皮细胞；
(3)将(2)得到的转基因细胞与小鼠或大鼠肿瘤细胞融合，制备转基因杂交瘤细胞；杂交瘤细胞用催乳素诱导杂交瘤细胞表达，筛选出表达特性优良的细胞株；
(4)用筛选出的高表达转基因杂交瘤细胞接种泌乳期BALB/C小鼠或大鼠腹腔，收集小鼠或大鼠腹腔液获得重组蛋白。
2、权利要求1的方法在制备人乳铁蛋白中的应用，其特征在于，其具体的步骤是：
(1)构建含有5′核心序列-功能基因-3′核心序列-NEOr基因构件的表达载体pBnLC2G，所说的5′核心序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，其中SEQ ID NO.2位于SEQ ID NO.1上游，3′核心序列如SEQ ID NO.3所示；
(2)分离上述(1)构建的表达载体中的基因构件，制备转基因小鼠或大鼠，从转基因鼠后代成体中分离得到转基因淋巴细胞、成纤维细胞或乳腺上皮细胞；
(3)将(2)得到的转基因细胞与小鼠或大鼠肿瘤细胞融合，制备转基因杂交瘤细胞；杂交瘤细胞用催乳素诱导杂交瘤细胞表达，筛选出表达特性优良的细胞株；
(4)用筛选出的高表达转基因杂交瘤细胞接种泌乳期BALB/C小鼠或大鼠腹腔，收集小腹腔液获得重组蛋白。
3、根据权利要求2所说的应用，其特征在于，其中步骤(3)中所说的肿瘤细胞是SP2/O。
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