[发明专利]18个基因座的荧光标记复合扩增检验系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种18个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，具体是涉及一种同时分析人基因组DNA18个基因座的五色荧光标记复合扩增系统，该系统可以应用于个体识别和亲子鉴定。

背景技术

短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是STR基因座具有片段小容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了13个STR基因座用于建立DNA数据库——CODIS(Combined DNA Index System)：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、HUMTH01、TPOX、vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。正因为STR所具备的优点和应用前景，法医学界以及一些大的公司均投入大量的资金对其进行了开发性的研究。90年代中后期以美国ABI公司为代表的研发商建立起荧光复合扩增体系。目前最具代表性的是ABI(Applied Biosystems，USA)公司的Identifiler^TM和Promega(USA)公司的PowerPlex-16荧光检测试剂盒。这两个试剂盒均包括上述13个核心基因座。

长期的DNA检验实践表明，短串联重复序列基因座的遗传多态性在种族间存在一定的差异，各个基因座间差别也很大。在美国FBI推荐的13个核心基因座中，有部分基因座遗传多态性不高，或是不同人群间差异较大。由此给DNA检验技术的应用及其效率带来一定的影响。

专利ZL200510096613.6公开了一种同时分析人基因组DNA的多个基因座的荧光标记复合扩增系统，其特征在于：所述的15个基因座为：Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta E、CSF1PO、vWA、FGA。该专利提供了对15个基因座的分型结果，为4色荧光检测系统，其基因座分型系统的累积个体识别能力为3.49×10^-18，累积非父排除率为0.999,999,6。

我们对中国人群的短串联重复序列基因座的遗传多态性进行了深入的研究，并以此为依据开发新的短串联重复序列基因座的复合扩增检验系统，以求在5色荧光检测系统中，提供对包括Amelogenin在内的18个基因座的分型结果，同时提高系统的累计个体识别能力和累积非父排除率。

发明内容

本发明的目的之一在于：提供一种通过复合扩增18个基因座来进行个体识别和亲子鉴定的荧光标记STR复合扩增检验系统。涉及检测人基因组中具有多态性的遗传标记。本发明特别涉及用聚合酶链式反应在一个体系中同时扩增多个短串联重复基因座。

为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：

一种同时分析人基因组DNA的18个基因座的荧光标记复合扩增系统，复合扩增分析的18个基因座为：Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、Penta E、TPOX、TH01、CSF1PO、vWA、FGA。

本发明是在一个复合扩增反应体系中同时扩增18个基因座；将18个基因座分为四组并分别用四种颜色的荧光染料分别进行标记：Amelogenin、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539和Penta E为一组；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO和D19S433为一组；vWA、D5S818、FGA和D6S1043为一组；D8S1179、D21S11和D18S51为一组。

本发明所采用的18个基因座被位于该基因座两侧的一对引物扩增，其中每对引物中有一个引物的5’端进行荧光染料标记；本发明的系统中包括每个基因座所对应的等位基因标准物的混合物，以确定DNA样品中各个基因座的等位基因；本发明的系统中包含的用于鉴别DNA样品性别的基因座是Amelogenin基因座；本发明的荧光标记复合扩增系统扩增多个基因座采用聚合酶链式反应进行，检测方法采用多道或单道毛细管电泳。