[发明专利]靶向FAK和EGFR的 RNA干扰质粒－脂质体抗肿瘤复合物

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤基因治疗领域，具体涉及靶向FAK和EGFR的RNA干扰载体-脂质体抗肿瘤复合物。

背景技术

目前肿瘤的基因治疗获得了蓬勃快速的发展，但是至今为止，仍然存在许多需要解决的问题。而其中急需解决的问题是：目前用于肿瘤基因治疗的基因太少，能抑制肿瘤生长的基因为数不多，急需提供更多可供利用的基因；另外，由于肿瘤的发生、发展、转移等过程是一个多基因参与、涉及多条信号通路的复杂网络系统，因此单个基因治疗或单一治疗方法往往疗效有限。因此，未来基因治疗发展的重点将在于挖掘并鉴定在临床上有治疗价值的基因，探索多个具有不同抗肿瘤作用机理的基因联合治疗以及将肿瘤基因治疗与化疗、放疗合用。

Focal-adhesion kinase(FAK)基因是一个整合素家族成员基因，是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶，参与调控细胞的运动与增殖等，它可促进细胞向细胞外基质附着，在肿瘤发生、发展、转移、预后过程中扮演重要功能。FAK基因可以促进肿瘤细胞迁移，从而导致肿瘤扩散、转移，同时也影响肿瘤治疗的预后效果。大量研究发现FAK基因在多种肿瘤组织中较正常组织表达明显增高，在发生肿瘤转移和预后差的病人组织中检测到FAK基因表达水平显著上调，如FAK基因在100％的结肠癌和88％的乳腺癌患者组织中表达上调，另外在肺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、口腔上皮癌、头颈部鳞状上皮癌、黑色素瘤、急性髓细胞样白血病、甲状腺癌等恶性肿瘤中表达增加，而且FAK基因表达水平上调直接与肿瘤的发生、发展、转移、预后相关，因此，FAK基因是肿瘤治疗潜在的理想靶标。

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor，EGFR)EGFR是一种跨膜蛋白质，属于ErbB家族的一员，由细胞外的结合区、跨膜区及主要由酪氨酸激酶组成的胞内区组成。当EGF以及其他生长因子与EGFR的胞外区相结合时，受体的酪氨酸激酶就会被活化，继而启动细胞内一连串的信号传导通路。大量研究发现EGFR基因在多种肿瘤中过表达或异常活化，从而使肿瘤细胞增殖、侵袭和转移能力增强，在非小细胞肺癌中，EGFR基因异常高表达，而且活性增高，EGFR已成为目前肺癌治疗的重要靶分子。

目前，RNA干扰已经广泛用于肿瘤治疗研究，但大多数是利用化学合成的siRNA对肿瘤进行治疗，而化学合成的siRNA治疗存在以下缺点：化学合成的siRNA用量大，使用成本高，产业化难度大；化学合成的siRNA在体内作用的稳定性差，时间短，每次使用时对操作人员的技术要求较高；多次输注对患者的生活质量也有不好的影响。同时从文献报导来看，单个基因的RNA干扰效果往往不是十分理想，因为肿瘤的发生、发展、转移、侵袭等是一个涉及多基因、多步骤复杂的过程，可能涉及的是多个基因、多条信号通路，所以针对多个靶点基因进行RNA干扰治疗可能是一个更好的选择，效果也有可能更好，同时将双基因甚至多基因的RNA干扰治疗与化疗、放疗合用在临床肿瘤治疗方面可能更有前景，但目前未见相关报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种能靶向FAK和EGFR双基因的RNA干扰表达载体。该RNA干扰表达载体能在体内表达FAK基因的RNA干扰序列：

5-’AACCACCTGGGCCAGTATTAT-3’(SEQ ID NO.1)和EGFR基因的RNA干扰序列：5’CACAGTGGAGCGAATTCCT-3’(SEQ ID NO.2)。

其中，上述的表达载体为质粒。

其中，上述质粒的骨架为pGensil-2，含有人的U6和H1启动子，分别用于启动FAK基因RNA干扰表达框架和EGFR基因RNA干扰表达框架。

其中，表达FAK基因的RNA干扰序列的表达框架序列为SEQ ID NO.7所示。

其中，表达EGFR基因的RNA干扰序列的表达框架序列为SEQ ID NO.8所示。

进一步的，上述RNA干扰表达载体具有SEQ ID NO.9所示的序列。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供上述的RNA干扰表达载体的脂质体复合物。

其中，上述的脂质体为阳离子脂质体。

其中，上述阳离子脂质体是由摩尔比为1∶1的DOTAP和胆固醇(Chol)组成。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供上述RNA干扰表达载体或上述的脂质体复合物在制备抗肿瘤药物组合物或抗肿瘤辅助药物组合物中的用途。