[发明专利]远源百合杂交植株的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及杂交植株培育方法，特别是涉及远源百合杂交植株的培育方法。

背景技术

百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lillium)植物的总称，多年生草本。目前，全球约有115种，我国已发现有55个种，18个变种，占世界百合属植物的一半。20世纪初，国外以荷兰、日本和美国为中心，开展了百合的育种工作，利用本身已经优良的东方系、麝香系和亚洲系百合进行组间和种间杂交，培育出具有良好商业性状的新品种，推出OT和LA系列杂交新品种。目前市场上主要的百合切花品种集中在亚洲系(Asiatic hybrids)、东方系(Orientalhybrids)、麝香系(Longiflomm hybrids)、OT型、LA型等5个品系上。我国对百合杂交后代的培育，仅局限于百合野生资源的种质之间，进行种间杂交，到现在三十多年来没有新品种获得商业价值。

种间杂交及多倍化育种是国外花卉育种的重要途径，百合育种更是如此。在百合常规杂交育种过程中，所选配的许多杂交组合或者完全不亲和，或者虽然亲和，但胚发育不全，致使杂交不易成功。百合种间杂交的不亲合一直是困扰国内外百合杂交育种的技术难题。国外对AO、OT和LA曾经采用柱头离体受精的方法进行过组间杂交，但目前还未见LOT和OTL型杂交新种质的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中百合种间杂交的不亲和的缺陷，提供一种远源百合杂交植株的培育方法，该方法能较好的解决种间杂交的不亲和问题

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

远源百合杂交植株的培育方法，包括如下步骤：

(1)子房和花药的离体培养：将百合切花材料插入水中，采开花前1～2天的花蕾，分离花蕾中成熟但尚未开放的花苞，灭菌后剥去花瓣，将子房和花药分别接入MS培养基+0.02mg/l萘乙酸的培养基中培养；

(2)离体授粉：4～7天后，将母本的子房切断，直接授粉于子房的切断面上，将授粉后的子房置于MS培养基+0.02mg/l萘乙酸的培养基中培养；

(3)胚培养：45～50天后，取出膨大而变黄的子房，剥出胚珠接种于诱导培养基中，培养100～120天后将胚珠中的胚剥取，接种至MS培养基+0.02mg/l萘乙酸的培养基中，7～10天后即得杂交植株；其中诱导培养基的组成为：以MS为基本培养基，含6％蔗糖、0.01～0.05mg/l萘乙酸、7g/l琼脂，PH值为5.8。

在上述的步骤(2)中，母本的子房最好在距离顶端1～2cm处切断。授粉后的子房的培养条件为25℃、光照强度1500lux、光照时间12小时。

上述步骤(1)具体为：将百合切花材料插入水中，采开花前1～2天的花蕾，分离花蕾中成熟但尚未开放的花苞，置于75％酒精中浸泡1～2分钟，取出，无菌水清洗3次，0.1％HgCl消毒4～6分钟，无菌水再清洗3次，用无菌滤纸吸干水份，剥去花瓣，将子房和花药分别接入MS培养基+0.02mg/l萘乙酸的培养基中培养。

上述步骤(3)具体为：45～50天后，取出膨大而变黄的子房，剥出胚珠接种于诱导培养基中，在25℃下暗培养21天，然后25℃、1500lux白炽灯条件下全天光照培养21天，此后晚上八点打开白炽灯、早上八点关闭进行培养，100～120天后将胚珠中的胚剥取，接种至MS培养基+0.02mg/l萘乙酸的培养基中培养，7～10天后即得杂交植株。

前述远源百合的母本为L型百合，父本为OT型或O型百合。其中所述L型百合为新铁炮，OT型百合为黄色风暴，O型百合为蒂伯。国外对AO、OT和LA进行过组间杂交，但还未见L×OT型杂交新种质的报道。本发明通过离体培养对麝香百合系L型“新铁炮”和OT型“黄色风暴”及O型百合“蒂伯”进行组间杂交，采用前述子房切断的授粉方式以及离体胚抢救技术来克服受精前后的障碍，获得了L×OT、L×O的新型百合杂交后代。

发明人对不同的授粉方式、灭菌方式以及培养基都进行了研究，具体如下：

一、材料和方法

材料：杂交品种OT型“黄色风暴”(L.‘yellowenn’)、麝香百合系L型“新铁炮”(L.‘formolingi’)及O型百合“蒂伯”(L.‘Tiber’)三个品种，无菌条件下接种在培养基中。

方法：

1.1子房、花药离体培养

在超净工作台上，取成熟但尚未开放的花苞，灭菌，剥去花瓣，将子房和花药分别接入MS+0.02mg/l萘乙酸培养基中，观察45天再进行杂交授粉。杂交组合为L×OT、OT×L和L×O。