[发明专利]使用遗传修饰的乳杆菌通过抗原的粘膜递送治疗免疫疾病

说明书

本发明涉及通过经由微生物特别是乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)粘膜递送分泌的免疫显性抗原来治疗自身免疫和变应性疾病。

发明领域

免疫系统具有区别自身和非自身物质的任务。沿着呼吸道、胃肠 道和泌尿生殖道存在的粘膜免疫系统具有与丰富的细菌和无害抗原例 如食物、空气播散的抗原或共生的细菌群落共存的另外的负荷。粘膜 免疫系统的关键特征是它保留对这些抗原耐受的能力，同时保留有效 击退病原体的能力。无论通过注射还是损伤，全身性引入抗原导致炎 性细胞的局部浸润和特异性免疫球蛋白的产生。相比之下，在粘膜表 面例如胃肠道和泌尿生殖道处引入的抗原引发免疫应答对于那些抗原 的全身性有效抑制。通过经由胃肠道施用抗原特异性诱导这些被调节 的应答称为口服耐受性(oral tolerance)。抗原的经口施用可以导 致全身性无应答性，并且是具有不希望有的副作用(例如类固醇)的 免疫抑制医学发明的有吸引力的替代物。本发明特别地属于通过持续 暴露于低剂量的抗原获得的低剂量耐受性的领域。经由粘膜的耐受性 诱导已提议作为针对自身免疫、变应性和炎性疾病的治疗策略。

技术发展水平

本发明背景的下述讨论仅用于帮助读者理解本发明，并非承认其 描述或构成本发明的现有技术。

自身免疫、变应性和炎性疾病对患者和社会造成巨大负担，导致 降低的生活质量和巨大成本。此外，不存在具有可接受的副作用或在 全社会中合适的适当治疗。关于自身免疫疾病的目前治疗在很大程度 上是姑息性的，一般是免疫抑制或抗炎性的。非免疫治疗例如在桥本 氏甲状腺炎或DM1型中的激素替代产生自身攻击性应答的结果。类固 醇或NSAID治疗限制了许多疾病的炎性症状。IVIG用于CIDP和GBS。 更具体的免疫调节治疗例如TNFα拮抗剂依那西普已显示在治疗RA中 是有用的。然而，这些免疫治疗可能与增加的不良反应风险相关，例 如对感染增加的易感性。可以表征为慢性小肠炎症的乳糜泻(celiac disease)仅能够通过限制的饮食进行有效治疗，这要求终生禁食包含 小麦、黑麦或大麦的食物。虽然严格不含谷蛋白的饮食可以导致小肠 治愈，但对谷蛋白的不耐受性是永久的。

也称为口炎性腹泻(celiac sprue)或谷蛋白敏感性肠病的乳糜 泻是慢性炎性疾病，其由针对包含谷蛋白的特别饮食谷物的免疫应答 发展。可以基于腹泻、脂粪、腹部气胀和绞痛、重量减轻、代谢性骨 疾病、贫血的常规表现以及对于麦醇溶蛋白和组织转谷氨酰胺酶(tTG) 具有特异性的血清抗体(也称为抗肌内膜)的存在进行诊断。粘膜损 伤集中于小肠的近端部分，并且特征在于绒毛萎缩、隐窝细胞增生、 以及上皮和固有层的淋巴细胞性浸润，其响应麦醇溶蛋白释放促炎细 胞因子例如IL-2和IFN-γ。乳糜泻可以视为人中最常见的食物敏感 性肠病，并且可以在个人生命中的任何时候出现。其流行率在西方、 阿拉伯和印度人口中为1∶100至1∶300。除谷蛋白外，该疾病还可 以在手术、病毒感染、严重情绪应激、妊娠或分娩后首次触发。

因此，抗原特异性口服耐受性的诱导将是有吸引力的治疗方法。 尽管口服耐受性在1911年首次描述，但直到20世纪70年代末期研究 者才开始致力于所涉及的机制(Mayer和Shao，2004a)。对于口服耐 受性的发展已提出几个机制，从抗特异性T细胞的缺失、超过免疫偏 离和无反应性的诱导到经由Treg的抑制(Mucida等人，2005)。大 多数研究者认为，存在获得口服耐受性的2种不同途径，在单次高剂 量抗原后获得的高剂量耐受性，其基于无反应性和/或缺失(Friedman 和Weiner，1994)，和通过反复暴露于低剂量抗原获得的低剂量耐受 性，其通过经由CD4⁺T细胞的免疫应答的有效抑制介导，所述CD4⁺T 细胞包括Foxp3⁺、IL-10和/或TGF-β产生调节T细胞。重要的是，通 过粘膜耐受诱导的调节T细胞已显示介导旁观者抑制(bystander suppression)，即通过其对于一种蛋白质特异的调节细胞抑制附近效 应细胞对另一种蛋白质的应答的过程。旁观者抑制是抗原诱导的抑制 的另一个重要特征，因为诱导器官特异性自身免疫的抗原库大部分是 未知的，并且它废除了表位扩展(epitope spreading)现象。表位扩 展是自身免疫和变应性疾病的并发症，通过其起始免疫应答随着时间 扩展，以诱导对于其他抗原的应答。