[发明专利]特异性提高的转谷氨酰胺酶变体

权利要求书

1.分离的肽，其包含与SEQ ID No.1中的氨基酸序列具有至少80％ 同一性的氨基酸序列，其中所述序列在与SEQ ID No.1的氨基酸残基 Tyr62、Tyr75和Ser250对应的一个或多个位置处被修饰。

2.根据权利要求1的分离的肽，其包含与SEQ ID No.1中的氨基 酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，其中所述序列在与SEQ ID No.1的氨基酸残基Tyr62、Tyr75和Ser250相对应的一个或多个位置处 被修饰。

3.根据权利要求2的分离的肽，其包含在SEQ ID No.1中定义的 氨基酸序列，其中所述序列在与SEQ ID No.1的氨基酸残基Tyr62、Tyr75 和Ser250相对应的一个或多个位置处被修饰。

4.根据权利要求1-3中任一项的分离的肽，其中通过在N-末端添加 1-10个氨基酸残基来修饰所述氨基酸序列。

5.根据权利要求4的分离的肽，其中添加的二肽基是Gly-Pro-。

6.根据权利要求4的分离的肽，其中添加的二肽基是Ala-Pro-。

7.根据权利要求1-4中任一项的分离的肽，该肽具有转谷氨酰胺酶 活性。

8.根据权利要求5或权利要求6的分离的肽，该肽具有转谷氨酰胺 酶活性。

9.根据权利要求7或权利要求8的分离的肽，该肽具有与hGH的 Gln-40相比对hGH的Gln-141的特异性，该特异性高于具有SEQ ID No. 1所示氨基酸序列的肽与hGH的Gln-40相比对hGH的Gln-141所具有 的特异性。

10.核酸构建体，其编码根据权利要求1-9中任一项的肽。

11.根据权利要求10的核酸构建体，其中所述核酸构建体包含核 酸序列，该核酸序列编码蛋白酶底物氨基酸序列，该蛋白酶底物氨基酸 序列被表达为所述核酸构建体编码的根据权利要求1-9中任一项的肽的 N-末端部分或C-末端部分。

12.载体，其包含根据权利要求10或权利要求11的核酸。

13.载体，其包含根据权利要求10或权利要求11的核酸。

14.宿主细胞，其包含权利要求12的载体。

15.组合物，其包含根据权利要求1-9中任一项的肽。

16.制备根据权利要求1-9中任一项的肽的方法，其中

i)在允许表达所述肽的条件下，发酵能够重组表达所述肽的宿主 细胞；和

ii)在任何其它离子交换层析之前，对包含来自步骤i)下的发酵的 重组肽的组合物进行阳离子交换层析。

17.制备根据权利要求1-9中任一项的肽的方法，其中

a)在允许表达所述肽的条件下，发酵能够重组表达所述肽的宿主 细胞，其中所述宿主细胞包含根据权利要求13的载体；和

b)用能切割蛋白酶底物氨基酸序列的蛋白酶对包含来自a)下的 发酵的重组肽的组合物进行处理。

18.缀合肽的方法，其中所述方法包括，在存在根据权利要求1-9 中任一项的肽时，使所述肽与胺供体反应。

19.根据权利要求18的缀合肽的方法，其中要缀合的肽是生长激 素。

20.根据权利要求19的缀合生长激素的方法，其中所述生长激素是 hGH或其变体或衍生物，其中相对于在对应于hGH的位置Gln-40的位 置处缀合的hGH的量，在对应于hGH的位置Gln-141的位置处缀合的 生长激素的量，与在所述方法中使用具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列 的肽替代根据权利要求1～9中任一项的肽时，相对于在对应于hGH的 位置Gln-40的位置处缀合的hGH的量，在对应于hGH的位置Gln-141 的位置处缀合的hGH的量相比显著增加。