[发明专利]肽-补体缀合物

说明书

本发明报道了抗融合肽与补体因子C1q球形头衍生多肽的缀合物。

发明背景

HIV病毒对细胞的感染受到这样过程的影响，其中待被感染细胞的膜 与病毒的膜融合。提出了用于该过程的一般图解：病毒包膜糖蛋白复合体 (gp120/gp41)与位于待被感染细胞的膜上的细胞表面受体相互作用。gp120 结合例如CD4受体与共受体如CCR-5或CXCR-4组合引起gp120/gp41 复合体构象的改变。该构象改变的结果是gp41蛋白能够插入靶细胞的膜 中。该插入是膜融合过程的开始。

已知因天然存在的多态性，gp41蛋白的氨基酸序列在不同的HIV毒 株中不同。但是可以精确地识别相同的结构域结构：融合信号、两个七残 基重复结构域(HR1，HR2)和跨膜结构域(以N末端到C末端的方向)。 据提示，融合(或融合的)结构域参与插入细胞膜及细胞膜解体。HR区 由多段组成，每一段包含7个氨基酸(“七残基”)(参阅例如Shu，W.，等， Biochemistry 38(1999)5378-5385)。除七残基外，还存在一个或更多个亮 氨酸拉链样基序。该组成解释了gp41蛋白卷曲螺旋结构的形成，也正好解 释了来自这些结构域的肽的卷曲螺旋结构形成。卷曲螺旋一般而言是由两 个或更多个相互作用的螺旋组成的寡聚体。

具有从gp41的HR1或HR2结构域推导的氨基酸序列的肽是HIV进 入细胞有效的体外及体内抑制剂(例如，肽参阅例如US 5,464,933、 US 5,656,480、US 6,258,782、US 6,348,568或US 6,656,906)。例如，T20 (也称为DP178，HR2肽)和T651(US 6,479,055)是HIV感 染的非常有效的抑制剂。已经尝试利用例如氨基酸替换或化学交联来增强 HR2衍生肽的功效(Sia，S.K.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 99(2002) 14664-14669；Otaka，A.，等，Angew.Chem.Int.Ed.41(2002)2937-2940)。

人的先天免疫包含补体途径。该途径通过C1补体因子的识别亚基C1q 结合免疫靶标而被激活。全长C1q分子是异数分子，其包含六个拷贝的三 个单体结构单元(其命名为C1qA、C1qB和C1qC)中的每一个结构单元。 每一单体单元包含N末端区(3到9个残基)、胶原样结构域(横跨大约 81个残基)和球形结构域(球形头部；横跨大约135个残基)(Sellar，G.C.， 等Biochem.J.274(1991)481-490)。

Moir等报道了HIV-1通过补体途径的激活感染B细胞(Moir，S.，等，J. Exp.Med.192(2000)637-646)。人补体途径的激活源自gp41的免疫显性 区(gp160的590-620位；根据Ratner，L.，等，Nature 313(1985)277-284 的编号)与补体因子C1q的结合(Ebenbichler，C.F.，J.Exp.Med.174(1991) 1417-1424)。Thielens等报道了人C1的C1q亚成分与HIV-1的跨膜包膜 糖蛋白gp41在gp160的590-613位氨基酸区内相互作用。该相互作用可被 包含gp160第601-613位氨基酸的肽(具有连接Cys 605和Cys 611的二 硫键)抑制(Thielens，N.M.，等，J.Immunol.151(1993)6583-6592)。

发明简述

本发明包含多肽缀合物，所述多肽缀合物包含选自包含SEQ ID NO： 01的多肽及其片段的第一多肽和选自抗融合肽的第二多肽。

在一个实施方案中，本发明的缀合物以选自以下顺序的顺序包含第一 和第二多肽：

N末端-第一多肽-第二多肽-C末端，

N末端-第二多肽-第一多肽-C末端。

在另一实施方案中，本发明的缀合物包含第一和第二多肽之间的接头 多肽。

本发明还报道了多肽缀合物，其包含

a)选自包含SEQ ID NO：01的多肽及其片段的第一多肽(1st pp)，

b)选自抗融合肽的第二多肽(2nd pp)，