[发明专利]包括用含3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸的共存培养基培养植物组织的共存步骤的提高植物转化效率的方法

权利要求书

1.一种提高玉米未成熟胚转化效率的方法，该方法包括：

(i)共存步骤：用含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸的共存培养基培养接种了土 壤杆菌的玉米未成熟胚，所述共存培养基中不含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸 以外的生长素类，且所述共存培养基为以LS无机盐类为基本成分的培养基， 所述共存培养基还含有硝酸银和/或硫酸铜；和

(ii)选择步骤：用含有2，4-二氯苯氧基乙酸的选择培养基培养(i)中所得 的组织，所述选择培养基中不含2，4-二氯苯氧基乙酸以外的生长素类，且所 述选择培养基为以LS无机盐类为基本成分的培养基，所述选择培养基中含 有抗生素和/或除草剂，所述抗生素选自潮霉素、卡那霉素、灭瘟素S、羧 苄西林、头孢噻肟，所述除草剂选自草胺膦、双丙胺膦、草甘膦。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述共存培养基中的3，6-二氯-2- 甲氧基苯甲酸的浓度为0.5-3.0mg/l。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，与仅使用2，4-二氯苯氧基乙 酸作为共存培养基中的生长素类的情况相比，玉米的转化效率提高至少1.3 倍。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述玉米未成熟胚经过了 热处理和/或离心处理。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述玉米未成熟胚经过了热处理 和/或离心处理。

6.一种转化玉米的制备方法，该方法包括以下步骤：

(i)共存步骤，用含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸的共存培养基培养接种了 土壤杆菌的玉米未成熟胚，所述共存培养基中不含3，6-二氯-2-甲氧基苯甲 酸以外的生长素类，且所述共存培养基为以LS无机盐类为基本成分的培养 基，所述共存培养基还含有硝酸银和/或硫酸铜；

(ii)选择步骤：用含2，4-二氯苯氧基乙酸的培养基培养(i)中所得的组织， 所述选择培养基中不含2，4-二氯苯氧基乙酸以外的生长素类，且所述选择培 养基为以LS无机盐类为基本成分的培养基，所述选择培养基中含有抗生素 和/或除草剂，所述抗生素选自潮霉素、卡那霉素、灭瘟素S、羧苄西林、 头孢噻肟，所述除草剂选自草胺膦、双丙胺膦、草甘膦；和

(iii)再分化步骤：用含选择药物的再分化培养基培养(ii)中选择出的组 织，使其再分化。