[发明专利]消耗血液组织内特定细胞群的方法和组合物

说明书

技术领域

本发明涉及分离细胞的方法和组合物，更具体涉及分离外周血、骨髓、脐 带血以及相关血液组织中的细胞的方法和组合物。

背景

分离供体外研究或细胞疗法所用的细胞通常包括首先分离血细胞组分，主 要是大量消耗占血液细胞物质99％以上的红细胞。不能提供长期治疗潜能(例 如，粒细胞)、导致发病(例如，与骨髓移植相关的移植物抗宿主病(GVHD)中的 T-细胞，或输血相关反应中的红细胞)或者通常会干扰对感兴趣细胞群的监测能 力的其他细胞类型也被除去。移植之前耗尽骨髓中的T-淋巴细胞是一项用于降 低由T-细胞介导的GVHD发生率或程度的常规技术。用于消耗这些细胞群的 技术差异性依赖于要除去的细胞群。可能不需要完全除去T-细胞，因为它们对 移植物抗肿瘤效应可能有贡献。可进行调节以除去特定水平的T细胞污染物的 可调式细胞分离培养基可能是制备同种异体干细胞移植物的有用工具。

除去红细胞的技术基于红细胞低渗溶胞、密度梯度分离或采用羟乙基淀粉 的增强型离心沉降。低渗溶胞对于小体积体外研究有用，但对用于细胞疗法的 大体积血液组织处理可能无效。如果用于细胞治疗过程，红细胞低渗溶胞通常 是作为最终的清除步骤进行的，以在通过其它方法大量消耗后除去可能污染样 品的剩余红细胞。

密度-梯度分离依赖于不同细胞类型的密度差异造成在密度不同的流体介 质中不同水平上分离细胞。细胞类型之间的密度差异可以是小的，单个细胞类 型在大小和密度上可以是不等同的。因此，特定的细胞类型可分布在整个密度 -梯度介质中，而不是在密度介质中的独立区域精确地分离，这导致所需细胞 的回收差和/或被不需要的细胞类型污染。在罕见的血细胞类型如造血祖细胞的 富集过程中，通常密度-梯度沉降对所需细胞亚群的产量差。例如，据报道用 常规密度-梯度方法从脐带血中分离祖细胞(如，CD34⁺造血干细胞)导致大量损 失需要的干细胞。见如，Wagner，J.E.，Am J Ped Hematol Oncol 15：169(1993)。 作为另一个例子，据报道用常规密度-梯度方法分离淋巴细胞造成特定淋巴细 胞亚群的选择性丢失。见如，Collins，D.P.，J Immunol Methods 243：125(2000)。 这些分离方法在用于细胞疗法时有其他禁忌症，因为分离介质中的化学分子如 果与细胞一起输入接受者可能是有毒的。因此，必须进行其他步骤以确保它们 在输注之前被完全除去。诸如淘洗等仪器方法也依赖于通过密度差异分离血液 组分并且在执行时也可能遭遇类似的缺陷。

除去血液中红细胞的其他方法包括与羟乙基淀粉(即，海塔淀粉(heta starch)) 混合，该物质刺激当在离心机中以50xg沉降时比白细胞组分更快沉降的红细 胞聚集体形成。尽管该方法对于接受者通常是无毒且‘安全’的，但其回收包括 例如造血干细胞在内的重要细胞类型的性能会根据诸如温度、处理前的样品年 龄(收集后)、样品的细胞构成(每单位体积的细胞浓度)、样品体积以及抗凝剂 与血液样品的比例等因素而变化。例如，就脐带血而言，这些因素可导致干细 胞的回收不理想以及脐带血细胞的移植物移入潜能降低、移植失败风险升高。

提高供体组织中罕见细胞类型的回收率能显著改善移植和免疫疗法(例如， 骨髓移植、基于干细胞的基因疗法以及免疫细胞疗法)后果，其成功显然与用 于治疗的细胞的实际数量有关。此外，对同种异体骨髓或细胞因子引发的干细 胞移植而言，含有干细胞最高可能回收率并除去部分T-细胞的移植物使得移植 物成功存活的机会最大。

概述

本发明提供了有效的、不基于密度的、不基于颗粒的用于从外周血、脐带 血和骨髓中分离和回收有治疗或诊断价值的细胞的方法和组合物。具体地说， 本发明提供了专门去除在体外研究中干扰对感兴趣细胞的监测或当植入时会 造成发病的不需要细胞亚类的方法和组合物。所披露的组合物和方法可用于， 例如，为组织培养有效准备细胞、免疫表型确定、其他诊断测试、进一步纯化 以及治疗性给予。