[发明专利]新β-半乳糖苷-α2,6-唾液酸转移酶、编码该酶的基因和提高酶活性的方法

权利要求书

1.一种分离的蛋白质，该分离的蛋白质具有β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转 移酶活性，其为：

(a)由SEQ ID NO：4的氨基酸序列构成的蛋白质；或者

(b)由(a)的蛋白质以及选自His标签、FLAG^TM标签、谷胱甘肽-S-转移 酶中的标签构成的融合蛋白质。

2.一种分离的蛋白质，该分离的蛋白质具有β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转 移酶活性且由下述碱基序列构成的核酸编码：

(a)SEQ ID NO：3的碱基序列；或者

(b)(a)的碱基序列和编码选自His标签、FLAG^TM标签、谷胱甘肽-S- 转移酶中的标签的碱基序列。

3.权利要求1或2所述的分离的蛋白质，其来源于属于发光杆菌属的 微生物。

4.权利要求1或2所述的分离的蛋白质，其反应最适pH为pH7～pH9.5 的范围。

5.一种分离的核酸，该分离的核酸编码具有β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转 移酶活性的蛋白质，编码的所述蛋白质为：

(a)由SEQ ID NO：4的氨基酸序列构成的蛋白质；或者

(b)由(a)的蛋白质以及选自His标签、FLAG^TM标签、谷胱甘肽-S-转移 酶中的标签构成的融合蛋白质。

6.一种分离的核酸，该分离的核酸编码具有β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转 移酶活性的蛋白质且由下述碱基序列构成：

(a)SEQ ID NO：3的碱基序列；或者

(b)(a)的碱基序列和编码选自His标签、FLAG^TM标签、谷胱甘肽-S-转 移酶中的标签的碱基序列。

7.包含权利要求5或6的核酸的表达载体。

8.用权利要求7的表达载体转化的宿主细胞。

9.一种生产具有β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转移酶活性的重组蛋白质的 方法，该方法包括以下步骤：

1)用包含权利要求5或6的核酸的表达载体转化宿主细胞；

2)培养所得的转化细胞；以及

3)从培养所得的转化细胞或其培养上清分离具有β-半乳糖苷-α2，6-唾液 酸转移酶活性的蛋白质。

10.β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转移酶在唾液酸转移反应中的应用，其中， 在具有下述组成的反应液中使用所述β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转移酶，所述 组成中包含pH7.0～pH9.5的磷酸缓冲液，

且所述β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转移酶为：

(a)由SEQ ID NO：4的氨基酸序列构成的蛋白质；

(b)由SEQ IDNO：3的碱基序列构成的核酸编码的蛋白质；或者

(c)由(a)或(b)的蛋白质与选自His标签、FLAG^TM标签、谷胱甘肽-S- 转移酶中的标签构成的融合蛋白质。

11.一种提高使用β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转移酶进行糖转移反应的效 率的方法，其中，通过在存在选自钠离子、钾离子的一价金属离子与选自 磷酸根离子、硫酸根离子、硝酸根离子中的阴离子形成的盐的条件下进行 所述反应，所述阴离子的浓度为0.1M，使得所述反应的效率与不存在该盐 的情况相比有所提高，

其中，所述β-半乳糖苷-α2，6-唾液酸转移酶为：

(a)由SEQ ID NO：4的氨基酸序列构成的蛋白质；

(b)由SEQ ID NO：3的碱基序列构成的核酸编码的蛋白质；或者

(c)由(a)或(b)的蛋白质与选自His标签、FLAG^TM标签、谷胱甘肽-S- 转移酶中的标签构成的融合蛋白质。