[发明专利]用于检测以“促进模式”调控钠钙交换体(NCX)的化合物的基于荧光的测定

权利要求书

1、检测NCX蛋白质活性的测定，其包括：

a)提供表达NCX的细胞；

b)提供检测细胞内钙的有色物质；

c)将细胞与NCX活性激活剂接触；和

d)将钙介导的所述有色物质发光信号的改变与对照实验中产生的发 光信号进行比较。

2、根据权利要求1所述的测定，其中所述NCX蛋白质为以下列出的 NCX蛋白质：NCX1、NCX2、NCX3。

3、根据权利要求1所述的测定，其中所述NCX蛋白质为哺乳动物来 源，优选来源于大鼠、小鼠、狗、牛、猪、猿或人。

4、根据权利要求1所述的测定，其中所述细胞选自CHO、HEK、COS7 和JURKAT细胞。

5、根据权利要求1所述的测定，其中所述有色物质以染料前体添加到 所述细胞中，该染料前体能够进入细胞并被水解成染料，从而在所述细胞 中该染料与钙复合并提供发光信号。

6、根据权利要求1和5所述的测定，其中所述发光信号为荧光，所述 检测步骤c)采用FLIPR装置。

7、根据权利要求5所述的测定，其中所述染料前体为乙酸甲酯衍生物。

8、根据权利要求5所述的测定，其中所述染料为钙敏感的荧光染料 fluo-4。

9、根据权利要求1-8中任一项所述的测定，其中所述NCX活性激活 剂为离子霉素。

10、根据权利要求1-9中任一项所述的测定在测试化合物作为NCX激 动剂或拮抗剂的活性中的用途。

11、根据权利要求1-9中任一项所述的测定用于诊断与NCX的表达改 变相关的疾病的用途。

12、测定响应化合物的加入的NCX蛋白质活性的测定，其包括：

a)提供表达NCX的细胞；

b)提供检测细胞内钙的有色物质；

c)将细胞与化合物接触，其中在用所述化合物处理所述细胞之前，用 NCX活性激活剂处理所述细胞；和

d)将钙介导的所述有色物质发光信号的改变与对照实验中产生的发 光信号进行比较。

13、根据权利要求12所述的测定，其中所述NCX蛋白质为以下列出 的NCX蛋白质：NCX1、NCX2、NCX3。

14、根据权利要求12所述的测定，其中所述NCX蛋白质为哺乳动物 来源，优选来源于大鼠、小鼠、狗、牛、猪、猿或人。

15、根据权利要求12所述的测定，其中所述细胞选自CHO、HEK、 COS7和JURKAT细胞。

16、根据权利要求12所述的测定，其中所述有色物质以染料前体添加 到所述细胞中，该染料前体能够进入细胞并被水解成染料，从而在所述细 胞中该染料与钙复合并提供发光信号。

17、根据权利要求12和16所述的测定，其中所述发光信号为荧光， 所述检测步骤c)采用FLIPR装置。

18、根据权利要求16所述的测定，其中所述染料前体为乙酸基甲酯衍 生物。

19、根据权利要求16所述的测定，其中所述染料为钙敏感的荧光染料 fluo-4。

20、根据权利要求12-19所述的测定，其中所述化合物为NCX拮抗剂。

21、根据权利要求12-19所述的测定，其中所述NCX激活剂为离子霉 素。

22、试剂盒，其包含：

a)表达NCX蛋白质的冻干细胞；

b)有色物质；

c)化合物缓冲液；和

d)有色物质缓冲液。

23、根据权利要求22所述的试剂盒，其中所述有色物质为钙敏感的荧 光染料fluo-4。