[发明专利]用于检测特异性免疫球蛋白G类抗体的方法

说明书

本发明涉及一种用于通过一步方式进行而无须洗涤步骤的测定确 定样品中的分析物的方法。

作为对引入外来物质的应答，哺乳动物生物体的免疫系统产生抗 体，抗体又名免疫球蛋白。它们充当针对外来物质的防御，外来物质 也称为抗原。所述免疫球蛋白可以分为五种不同的类型。人们将免疫 球蛋白区分为M、G、A、E和D类。这五种免疫球蛋白类型的区别在 于重链的组成，所述重链分别称为μ、γ、α、ε和δ链。

每个免疫球蛋白类型在生物体中具有不同的功能。M类免疫球蛋 白在第一次与抗原接触(所谓的初次免疫)的过程中发生。然而，随着感 染的进行，这些免疫球蛋白的浓度快速降低。G类免疫球蛋白首先在初 次免疫的过程中缓慢地形成，并且在以同样的抗原进行第二次感染时 大量存在。A类免疫球蛋白在生物体粘膜表面被发现，负责局部防御过 程。E类免疫球蛋白主要负责过敏反应。迄今为止，D类免疫球蛋白的 精确功能仍是未知的。

血液中各免疫球蛋白类型以非常不同的浓度存在。因此，G类免疫 球蛋白(IgG)是正常人血清中最丰富的类型，比例为约75％，相当于 8-18mg/ml的血清含量。第二最常见的免疫球蛋白是IgA，其平均血 清浓度为0.9-4.5mg/ml。M类免疫球蛋白以0.6-2.8mg/ml的浓度存 在，D类免疫球蛋白以0.03-0.4mg/ml的浓度存在。IgE抗体的比例是 最低的；它们仅以0.02-0.05μg/ml的浓度存在于血清中。

在现有技术中描述了多种用于检测针对抗原具有特异性的特定类 型的抗体的方法。因此，样品中特定类型的抗原特异性抗体的检测经 常通过将特异性抗体结合到包覆有所述特异性抗原的固相上进行。通 过将特异性地针对特定类型的人Ig的抗体结合到待检测的Ig分子上， 来检测对所述抗原具有特异性并且正结合于所述固相的免疫球蛋白 (Ig)。为针对人Ig的抗体提供标记，通过该标记进行检测。然而，这 样的测试过程(间接测试形式)只有在如下情况下才是可能的：如果在与 针对人Ig的类别特异性的标记抗体反应之前，通过洗涤除去所有非特 异性、未结合的Ig。因此，一步测试方法，例如自动化系统经常需要 的方法，不可能是这种形式的。

所谓的桥测试(bridge test)开启了在一步测试中进行抗体检测的可 能性。在EP-A-0280211中描述了桥测试的概念。在这种方法中，将能 够特异性结合待测定抗体(例如抗原)的第一结合配偶体(partner)结合 于固相。待测定抗体则与结合于固相的抗原结合。另一种具有标记的 特异性抗原也存在于测试混合物中。通过该标记来检测所述抗体。如 果不同类型但具有相同特异性的免疫球蛋白存在于样品中，则该测试 不能在不同类型之间进行区分。

EP 0 944 838 B1披露了一种桥测试检测方法，该方法能够选择性 确定样品中的抗原特异性IgG抗体，该样品中也含有具有相同特异性的 IgM。为此，所述抗原以单体形式使用。所述单体抗原具有如下效果： 具有相同特异性的IgM抗体不能与所述抗原反应或仅能与其微弱地反 应。

特异性抗体测试在感染血清学中至关重要，在所述感染血清学中， 检测了针对病原体的抗原结构的免疫反应。虽然用于获得病原体的抗 原的不同来源是现有技术(原核和真核系统中的重组表达；病原体的控 制性培养，从天然来源分离抗原)，但并不总是可以获得单体形式的抗 原，从而以一步形式进行IgG-选择性免疫测定。

EP 0 957 360 B1描述了在用于测定分析物的方法中使用类风湿因 子来降低Hook效应。

EP 1 098 198 A1描述了一种用于测定人IgG抗体的免疫测定。在该 案例中，使用了一种特殊的单克隆抗体，其针对结合于抗原的人IgG的 Fc片段的构象表位。该抗体用于选择性检测IgG，并且可以区分结合于 抗原的IgG和不结合抗原的IgG。然而，未结合的IgG的存在会干扰并 导致信号损失。

EP 1 653 233 A1描述了一种用于测定IgG类型的抗原特异性抗体的 测试方法，其中使样品与结合了抗原的固相接触。在该方法中，使用 单克隆抗体，该单克隆抗体区分未特异性结合于固相的免疫球蛋白和 结合于所述抗原的免疫球蛋白。使样品与固相接触后，将其洗去并随 后施加单克隆抗体。