[发明专利]用于细胞维持、扩增和/或分化的透明质酸、其他基质成分、激素和生长因子的复合物

权利要求书

1.一种在三维(3-D)条件下先体外后体内维持细胞的方法，该条件允许长期维持、扩增和/或分化，该方法包括：

(a)提供细胞；以及

(b)在无血清培养基中以及在具有或不具有其他细胞外基质成分和具有或不具有激素或生长因子的透明质酸复合物上培养细胞，以维持、繁殖和/或分化细胞群。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞是肝干细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞是成肝细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞是定向祖细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞是成熟细胞。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述透明质酸与其他细胞外基质成分和/或激素或者生长因子复合。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述细胞外基质成分是一种或一种以上胶原蛋白(例如III型胶原蛋白)、一种或一种以上基底粘附分子(例如层粘连蛋白)、一种或一种以上蛋白聚糖或它们的糖胺聚糖链(例如肝素蛋白聚糖)或者它们的混合物。

8.如权利要求5所述的方法，其进一步包括一种或一种以上激素。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述激素是胰岛素、转铁蛋白/Fe、三碘甲腺原氨酸、T3、生长激素、胰高血糖素，或者它们的组合。

10.如权利要求5所述的方法，其进一步包括一种或一种以上生长因子。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述生长因子是表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、白细胞介素、白血病抑制因子(LIF)、转化生长因子-β(TGF-β)，或者它们的组合。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述白细胞介素是IL-6、IL-11、IL-13，或者它们的组合。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述透明质酸被化学交联。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述透明质酸通过醛桥被化学交联。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述透明质酸通过二硫桥被化学交联。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述细胞外基质包括通过二硫桥交联的透明质酸，称为Extracell-LGTM。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞外基质进一步包括一种或一种以上特异性胶原蛋白、一种或一种以上基底粘附分子的特异性同种型、一种或一种以上种类特异性或组织特异性蛋白聚糖或它们的糖胺聚糖链、一种或一种以上激素和/或一种或一种以上生长因子，或者它们的混合物。

18.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞从肝脏中获得。

19.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞是成人肝细胞。

20.如权利要求18所述的方法，其中所述肝脏是胎儿的肝脏。

21.如权利要求18所述的方法，其中所述肝脏是新生儿的肝脏。

22.如权利要求18所述的方法，其中所述肝脏是儿童的肝脏。

23.如权利要求18所述的方法，其中所述肝脏是成人肝脏。

24.如权利要求1所述的方法，其中所述无血清培养基包括胰岛素、转铁蛋白或它们两者。

25.如权利要求1所述的方法，其中所述无血清培养基主要由胰岛素、转铁蛋白、脂类、钙、锌和硒组成。

26.如权利要求1所述的方法，其中所述无血清培养基主要由胰岛素、转铁蛋白、脂类、钙、锌和硒组成。

27.如权利要求1所述的方法，其中，所述无血清培养基不含任何生长因子或除胰岛素和转铁蛋白之外的任何激素。

28.一种先体外后体内繁殖细胞的方法，其包含：

(a)提供细胞；

(b)在无血清培养基上以及在透明质酸上培养细胞以使细胞群能够长期生存、扩增和/或分化。

29.如权利要求28所述的方法，其中所述细胞是干细胞。