[发明专利]粒状可溶的葡聚糖制备

说明书

背景技术

本申请要求2007年5月8日申请的，发明名称为“可溶葡聚糖制备”的U.S. 临时申请No.60/916,690的权益。

本发明涉及一种粒状可溶的β-葡聚糖。更具体而言，本发明涉及一种改良 方法和粒状可溶的β-葡聚糖的组合物。

葡聚糖通常描述为葡萄糖的聚合物且来源于酵母、细菌、真菌和植物例如 燕麦和大麦。已知含β(1-3)-连接的吡喃葡萄糖主链的葡聚糖具有生物活性，特 别是，它们表现出调控免疫系统，并且近来表现出诱导造血干细胞和祖细胞 (HSPC)活动。

之前，生产高质量的可溶β-葡聚糖很昂贵。例如，昂贵的成本抑制其作为 营养增补剂或食品成分。因此，需要一种改良的可溶β-葡聚糖。

发明概述

粒状β-葡聚糖在升高的温度和压力下溶解在酸性溶液中。采用例如离心和/ 或色谱技术可将制得的可溶β-葡聚糖进一步澄清和纯化。制得的产品甚至在还 含有高分子量葡聚糖时也可干燥成粉末且随后再溶解。

附图说明

图1-4是粒状可溶的β-葡聚糖样品的RI踪迹和数据转化图。

图5是各种β-葡聚糖诱导TNFa的生产的示意图。

发明内容

本发明所用的起始材料是由任何方法制备的粒状，或不可溶的β-葡聚糖。 粒状β-葡聚糖起始材料的大小范围可从整个(whole)葡聚糖颗粒小至亚微米大小 的颗粒。起始材料中的杂质水平也可变化。但是，随着起始材料中杂质水平的 增加，回收的可溶葡聚糖数量会降低。适宜作为起始材料的一个例子是来自 Biothera的WGP3-

许多来源的任意b-葡聚糖都可用于本发明。这些来源的例子为酵母、大麦、 燕麦、蘑菇和其他真菌等。

在压力和提高温度下以酸处理粒状β-葡聚糖以产生可溶β-葡聚糖。开始时， 将丸化的、粒状β-葡聚糖在缓冲液中再悬浮并混合于可密封反应容器中且调至 pH3.6。加入缓冲试剂以使每升总体积的最终悬浮混合物含有约0.61g乙酸钠， 5.24ml冰醋酸和430g丸化的，粒状β-葡聚糖。容器经氮气吹扫以去除氧气并增 加反应容器内的压力。

通常地，将容器内部压力调至35PSI，将悬浮液加热至约135℃至多约5.5 小时。发现在这样的条件下β-葡聚糖将溶解。随着温度从135℃下降，溶解量 也下降。

应该注意的是这个温度和压力仅对上述实施方式是最优的。如果反应条件 和/或试剂有任何改变则可能需要优化和调整温度和压力。

增加的压力和温度，通过实质上在工艺中消除使用有害化学物质，使其相 对于现有技术中溶解β-葡聚糖的工艺具有优势。之前所用的有害化学物质包括 例如可燃的VOC例如醚和乙醇，极强酸例如甲酸和硫酸和极高pH的苛性碱溶 液。本工艺不仅更安全，而且通过减少所用的不同化学物质的量和所涉及的步 骤数量，更为经济。

本工艺的另一个优势是上述处理的长度控制制得的粒状可溶的β-葡聚糖分 子量。如全文所用的术语，“粒状可溶的β-葡聚糖”可以是任何可溶的，粒状状 或再溶解形式。处理时间长度与制得的分子量大小负相关。换而言之，随着处 理时间的增长，制得的粒状可溶的β-葡聚糖的平均分子量降低。该原理如下文 所示。

在上述工艺期间的多个时间点(60，90，120和240分钟)，从一批粒状可 溶的β-葡聚糖悬浮液中收集四个样品。通过尺寸排阻色谱对比右旋糖苷分子量 标记测定样品的分子量。结果如表1所汇总。

表1