[发明专利]新型人抗R7V抗体及其应用

说明书

本发明涉及能够与HIV的R7V表位特异结合的新型人抗体。这些抗体 具有人的所有CDR并能够特异地中和包括逃逸突变体在内的所有HIV株。 其可以用于治疗HIV感染，特别是在HAART失败的患者中。

背景技术

HIV感染仍然是威胁公共健康的流行病。尽管药物治疗可以限制感染后 HIV的复制和毒力，但目前还没有预防性或治愈性的治疗方法。此外，高效 抗逆转录病毒疗法(HAART)除减少AIDS外，还导致多种副作用并导致耐药 病毒的出现，这加强了对其它抗HIV疗法的需求。然而，一些被称为“无进 展者”的HIV感染者在感染10年、15年或更长时间后并没有发展成为AIDS 病，这表明可以通过诸如减毒病毒¹、缺陷病毒²、HIV共同受体突变^3、4或 中和抗体⁵的出现等多种方法延缓HIV疾病。基于包膜的所有常规抗体诱导 疫苗都显示其因病毒高突变率而造成的局限性和弱免疫原性。在以往的研究 中⁶，我们证明了从无进展者的血清纯化出的广谱中和性抗R7V抗体的潜能。 这些免疫球蛋白靶向源自β2-微球蛋白并在出芽过程中并入HIV外壳中的被 称为R7V(RTPKIQV氨基酸序列)的细胞表位^7、8。本发明的目的是从无进展 患者的B-淋巴细胞中分离出相应的基因后，通过杆状病毒载体产生重组抗 R7V抗体。

所述杆状病毒技术可以产生并分泌出得到正确装配和糖基化的免疫球蛋 白⁹。这些重组的抗体具有亲本免疫球蛋白的所有功能特性^10、11，并显示有 效的效应子功能，例如结合(i)补体成分Clq^12、13或C3¹⁴和(ii)诱导抗体导向 细胞毒性所需的IgG Fc受体^15、16、13。

在本发明中，发明人构建了靶向于HIV病毒出芽过程中所需的细胞表位 R7V的重组抗体。已经从无进展患者的B淋巴细胞中克隆了编码抗R7V抗 体可变区的cDNA。构建了包含该抗体重链和轻链的完整编码序列的两个转 移载体，并通过杆状病毒DNA和两个转移载体之间的双重组产生重组杆状 病毒。被该杆状病毒感染的昆虫细胞产生完整的人抗R7V免疫球蛋白。发明 人已经证明所述特异于R7V肽的重组抗体识别并中和包括耐药病毒在内的 所有HIV1分化株，这给出了抗-HIV治疗的新思路。

发明内容

因此，根据本发明的第一实施方式，本发明的主题是分离的抗体或者其 一种功能片段，所述抗体或所述其一种片段能够特异地结合R7V表位 (RTPKIQV-SEQ ID No.11)并能够中和HIV株，其包含：

i)包含互补决定区CDR的轻链，所述CDR包含氨基酸序列SEQ ID No. 1(QSVLYSSNNKNY)、SEQ ID No.2(WAS)和SEQ ID No.3(QQYYSTPQT)， 或者所述CDR在最佳比对后其序列与SEQ ID No.1、2或3具有至少80％、 优选90％同一性；和

ii)包含CDR的重链，所述CDR包含氨基酸序列SEQ ID No.6 (GGSISSYY)、SEQ ID No.7(IYYSGST)和SEQ ID No.8(ARGRSWFSY)，或 者所述CDR在最佳比对后其序列与SEQ ID No.6、7和8具有至少80％、优 选90％同一性。

在本发明中，与抗体化合物或其序列相关的术语多肽、多肽序列、肽和 蛋白可以互换。

应理解，本发明不涉及天然形式的抗体，也就是说抗体没有处于其天然 环境中，但它们已能够通过纯化从天然来源中分离或获得，或者通过基因重 组获得，或者通过化学合成获得，并且能够包含如下文所述的非天然氨基酸。