[发明专利]样品中不溶的分析物的测量

权利要求书

1.一种检测生物学样品中至少一种不溶靶的方法，包括

(i)将所述样品与特异性结合所述靶的至少一种核酸酶保护分子(NPM)接触，

(ii)将所述样品在有效消除任何未结合的NPM的条件下暴露于一或多种试剂，

(iii)任选地从所述靶分离结合的NPM，以及

(iv)检测所述NPM的存在。

2.权利要求1的方法，包括检测结合形式或游离形式的所述NPM。

3.权利要求1的方法，其中所述不溶靶被固定和/或交联。

4.权利要求1的方法，其中所述不溶靶是肽、蛋白质或核酸。

5.权利要求4的方法，其中所述核酸分子包含核糖核酸(RNA)分子或者脱氧核糖核酸(DNA)分子，或者反义核苷酸，其可包含非天然碱基。

6.权利要求5的方法，其中所述RNA是信使RNA(mRNA)、核糖体RNA(rRNA)、转移RNA(tRNA)、微小RNA(miRNA)、siRNA，以及反义RNA或者病毒RNA(vRNA)。

7.权利要求5的方法，其中所述DNA是基因组DNA(gDNA)、线粒体DNA(mtDNA)、叶绿体DNA(cpDNA)，或者病毒DNA(vDNA)，或者转染的DNA。

8.权利要求1的方法，其中所述NPM包含特异性结合所述靶的核酸，或者适体。

9.权利要求8的方法，其中所述靶是蛋白质、肽、多核苷酸或者能与所述核酸或适体NPM杂交的蛋白质。

10.权利要求9的方法，其中所述靶是核酸。

11.权利要求8的方法，其中所述NPM包含DNA分子。

12.权利要求11的方法，其中所述NPM是单链DNA(ssDNA)或者支链DNA(bDNA)分子，或者含有LNA或PNA或者其它非天然碱基。

13.权利要求1的方法，其中所述NPM是特异性结合所述靶的核酸，且步骤(ii)包括用核酸酶处理以有效消除任何未结合的NPM。

14.权利要求13的方法，其中所述靶是核酸。

15.权利要求13的方法，其中所述靶是RNA分子(应理解微小RNA是RNA分子？)、siRNA或者反义RNA，其可包含非天然碱基。

16.权利要求15的方法，其中所述靶RNA分子与完整NPM分子或者其一部分杂交。

17.权利要求13的方法，其中所述NPM是单链(ssDNA)或者支链(bDNA)DNA。

18.权利要求13的方法，其中所述核酸酶是DNAase、RNAase或者其组合。

19.权利要求13的方法，其中所述NPM是DNA分子，所述核酸酶是DNAase。

20.权利要求13的方法，其中所述核酸酶是S1核酸酶。

21.权利要求1的方法，其中所述生物学样品是固定的。

22.权利要求1的方法，其中所述生物学样品包含导致靶分子交联的物质。

23.权利要求21的方法，其中所述固定包括用乙醇、福尔马林、二硫-二(琥珀酰亚胺丙酸酯)(DSP)处理所述样品。

24.权利要求1的方法，其中所述靶是交联的。

25.权利要求24的方法，其中所述靶与如下物质交联：二[硫代琥珀酰亚胺]辛二酸酯(BS3)、二琥珀酰亚胺辛二酸酯(DSS)、二琥珀酰亚胺戊二酸酯(DSG)、二琥珀酰亚胺酒石酸酯(DST)、戊二醛或者其衍生物。

26.权利要求1的检测固定的生物学样品中至少一种不溶核酸靶的方法，包括

(i)将所述样品与至少一种核酸酶保护分子(NPM)在足以促进所述靶与所述NPM结合的条件下接触，所述NPM分子是特异性杂交所述核酸靶的核酸分子，

(ii)将所述样品在有效消除任何未结合的NPM的条件下暴露于一或多种核酸酶，

(iii)任选从所述靶分离结合的NPM，但是使NPM不与组织结合，

(iv)检测所述NPM的存在。