[发明专利]免疫球蛋白纯化

说明书

本发明属于多肽纯化领域。报导了通过将溶液中的免疫球蛋白从杂质， 尤其是从免疫球蛋白聚合形式(aggregated form)分离而提供免疫球蛋白单 体形式的方法。

背景技术

蛋白质，尤其是免疫球蛋白在当今的医学领域中起着重要作用。对于 人的应用，每一种治疗蛋白质必须满足独特的标准。为确保生物药剂对人 的安全性，尤其要除去可导致严重伤害的核酸、病毒和宿主细胞蛋白质。 为满足这些质量管理规格标准，必须在生产过程之后进行一个或多个纯化 步骤。其中，纯度、生产量和产量在确定合适的纯化方法中起着重要作用。

已良好地建立不同的方法并且已将其广泛地用于蛋白质的纯化，例如 使用微生物蛋白质的亲和层析(例如A蛋白或G蛋白亲和层析)、离子交换 层析(例如，阳离子交换(磺丙基树脂或羧甲基树脂)、阴离子交换(氨乙基 树脂)和混合模式的离子交换)、亲硫吸附(例如使用β-巯基乙醇和其他SH 配体)、疏水性相互作用或芳香族化合物吸附层析(例如使用苯基-琼脂糖、 氮杂-arenophilic树脂或间-氨基苯基硼酸)、金属螯合亲和层析(例如使用 Ni(II)-和Cu(II)-亲和材料)、大小排阻层析和电泳方法(例如凝胶电脉、毛 细管电泳)(Vijayalakshmi，M.A.，Appl.Biochem.Biotech.75(1998) 93-102)。

Necina，R.等人，Biotechnol.Bioeng.60(1998)689-698报导了通过表 现为高电荷密度的离子交换介质从细胞培养物上清液直接捕获人单克隆抗 体。在WO 89/05157中，报导了通过直接对细胞培养基进行阳离子交换处 理以纯化产物免疫球蛋白的方法。Danielsson，A.等人，J.Immun.Meth.115 (1988)，79-88描述了从小鼠腹水一步纯化单克隆IgG抗体的方法。

Mhatre，R.等人，(J.Chrom.A 707(1995)225-231)探究了通过阳离子 交换层析和pH梯度洗脱对抗体Fab片段进行纯化。

WO 94/00561报导了人单克隆抗猕猴抗体和产生该抗体的细胞系。在 WO 2004/024866中报导了通过离子交换层析纯化多肽的方法，其中使用 梯度洗涤从一种或多种污染物中分离出目的多肽。Schwarz，A.等人 (Laborpraxis 21(1997)62-66)报导了使用CM-HyperD-柱对单克隆抗体 的纯化。

WO 2004/076485报导了使用A蛋白和离子交换层析进行抗体纯化的 方法。在EP 0530447中报导了通过组合三个层析步骤纯化IgG单克隆抗 体的方法。在US 4,983,722中报导了从抗体制品中除去A蛋白。

重组单克隆抗体方法常使用阴离子交换层析来结合痕量级杂质和潜在 污染物(如DNA、宿主细胞蛋白质和病毒)，而容许蛋白质流通(Knudsen， H.L.，等人，J.Chrom.A 907(2001)145-154)。

WO 95/16037报导了通过A蛋白阳离子交换层析进行的从杂种杂交瘤 纯化抗EGF-R/抗-CD3双特异性单克隆抗体。在EP 1 084 136中报导了通 过使用离子交换层析从抗体多聚体分离其单体。US 5,429,746涉及使用疏 水作用层析组合层析来纯化抗体分子蛋白质。

在US 4,604,208中报导了用来进行流体过滤，尤其是进行带电荷的微 粒污染的肠胃外液体或生物液体过滤的阴离子修饰微孔膜。WO 03/040166 报导了设计用于除去包含蛋白质的流体中的痕量杂质的膜和装置。

在US 6,716,598中报导了回收多肽的方法。在US 2006/0194953中报 导了选择性地从通过A蛋白亲和层析法纯化的抗体除去渗漏的A蛋白的方 法。

发明简述

本发明包含免疫球蛋白纯化领域的多个方面。一方面是纯化免疫球蛋 白的方法，其包括在免疫球蛋白单体形式不结合至阳离子交换材料的条件 下，将包含免疫球蛋白单体形式和聚合形式的缓冲水溶液用于阳离子交换 材料，并在与阳离子交换材料接触后从溶液回收免疫球蛋白单体形式的步 骤。在一个实施方案中，该步骤是以流通模式进行的层析步骤。