[发明专利]用于生产琥珀酸的微生物

权利要求书

1.分离的遗传修饰的微生物，其中天然基因MDH2被基因MDH2的截短的变体置换，和天然基因FUM1被来自不同于所述微生物的生物体的基因FUM1置换，和其中基因FRDS1被过度表达，和基因PYC1和/或PYC2之一或二者被过度表达。

2.根据权利要求1所述的微生物，其中基因MDH2的截短的变体编码MDH2蛋白，其最初的12个N－末端氨基酸，以及，任选地，C－末端脯氨酸被缩短。

3.根据权利要求1或2所述的微生物，其中所述微生物为酵母，并且其中基因FUM1选自包括“大肠杆菌、产琥珀酸厌氧螺菌、琥珀酸放线杆菌、Mannheimia succiniciproducens、谷氨酸棒杆菌”的组的生物体。

4.根据权利要求3所述的微生物，其中所述酵母选自包括“酵母菌属、复膜孢子酵母属、类酵母属、裂殖酵母属、威克酵母属、德巴利氏酵母属、汉逊酵母属、有孢汉逊酵母属、毕赤氏酵母属、克勒克酵母属、假丝酵母属、接合酵母属、Ogataea、Kuraishia、Komagataella、Yarrowia、梅奇氏酵母属、拟威尔酵母属、Nakazawaea、克鲁维酵母属、隐球酵母属、孢圆酵母属、布勒掷孢酵母属、红酵母、Willopsis和掷孢酵母属”的组。

5.根据权利要求3所述的微生物，其中所述酵母是酿酒酵母。

6.根据权利要求1或2所述的微生物，其中来自包括“FRDS1、PYC1和PYC2”的组的基因的至少一种在第二外源、组成性活性启动子的控制下。

7.根据权利要求6所述的微生物，其中所述第二外源、组成性活性启动子是ADH1启动子。

8.根据权利要求1~7任一项所述的微生物在琥珀酸生产中的应用。

9.根据权利要求1~7任一项所述的微生物在用于琥珀酸生产的方法中的应用，其中所述方法包括下面的步骤：

a）任选地，在需氧条件下在生长培养基中培养并繁殖所述微生物，

b）随后，任选地在厌氧条件下培养所述微生物，以及

c)在步骤b)之后或步骤b)期间，从培养物上清液分离琥珀酸，并任选地进行纯化。

10.根据权利要求9所述的应用，其中步骤a）被实施直到至少100 g 干生物量/l的细胞密度。

11.根据权利要求9所述的应用，其中步骤a）被实施直到至少120 g干生物量/l的细胞密度。

12.根据权利要求9所述的应用，其中步骤a）被实施直到至少140 g干生物量/l的细胞密度。

13.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤b）被实施直到至少0.4 mol/l的琥珀酸浓度。

14.根据权利要求9~12任何一项所述的应用，其中步骤b）被实施直到至少0.8 mol/l的琥珀酸浓度。

15.根据权利要求9~12任何一项所述的应用，其中步骤b）被实施直到至少1.0 mol/l的琥珀酸浓度。

16.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤a）在20~35 ℃的温度下实施，时间为1~1,000 h。

17.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤a）在20~35 ℃的温度下实施，时间为2~500 h。

18.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤a）在20~35 ℃的温度下实施，时间为2~200 h。

19.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤a）在28~30 ℃的温度下实施，时间为1~1,000 h。

20.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤a）在28~30 ℃的温度下实施，时间为2~500 h。

21.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤a）在28~30 ℃的温度下实施，时间为2~200 h。

22.根据权利要求9~12任一项所述的应用，其中步骤b）在15~40 ℃的温度下实施，时间为1 ~ 1,000 h。