[发明专利]诱导抗高危型人乳头瘤病毒的交叉反应性中和抗体的疫苗抗原

说明书

相关申请的相互参考

本申请要求2007年6月26日提出的日本特愿2007-167154号的优先权，在此引用其全部记载作为公开的内容。

技术领域

本发明涉及诱导抗高危型(高リスク群)人乳头瘤病毒的交叉反应性中和抗体的疫苗抗原。特别是，本发明涉及：在人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白质的特定部位插入人乳头瘤病毒16型的特定L2表位而得到的嵌合蛋白质以及作为该嵌合蛋白质的聚集体的病毒壳体。本发明的病毒壳体作为抗原是有用的，所述抗原能够作为疫苗使用而用于预防作为子宫颈癌的原因的人乳头瘤病毒群感染。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)(图1)是小型DNA病毒，存在100个以上的基因型，其中有15个基因型(高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73型)是子宫颈癌的原因。HPV16型在50-60％的子宫颈癌中被检出。在欧美以18型居多，而在日本以52、58型居多。有报告称：尽管日本努力通过群体检测诊断来实现早期发现，但每年仍有15000人发病、2500人死亡。

HPV病毒壳体为正20面体骨架上具有12分子的L2蛋白质的结构，所述正20面体骨架由72个L1蛋白质五聚体(病毒壳粒)形成。L2蛋白质的两端位于病毒壳体内部，而其N末端侧的一部分则露出在病毒壳体表面(L2-表面区域)(图2)。如果采用重组DNA技术仅使L1蛋白质大量表达，则会产生病毒样粒子(Virus-like particle；VLP)。如果将牛乳头瘤病毒、棉尾兔乳头瘤病毒的VLP或L2蛋白质接种于动物，则会对病毒侵染表现出抵抗性。而且，图2的HPV和VLP为截面示意图。

尚没有可供HPV增殖的培养细胞系。为了监测HPV的感染，制作了假病毒(偽ウイルス)。在表达SV40T抗原的人293细胞中导入具有SV40复制起点的分泌性碱性磷酸酶(SEAP)表达质粒、以及L1和L2蛋白质表达质粒，则复制的SEAP表达质粒组入L1/L2-病毒壳体，从而形成了感染性假病毒(图3)。可以通过抑制假病毒的感染性的活性来测定中和抗体。(非专利文献1)

将HPV的VLP接种于动物而得的抗血清具有基因型特异性的中和活性。Merck公司开发出了HPV16、18型VLP与作为尖锐湿疣(良性)的原因的6、11型VLP的混合疫苗，而GlaxoSmithKline公司开发出了HPV16、18型VLP的混合疫苗。(非专利文献2、非专利文献3)

这些疫苗在大规模临床实验中显示出基因型特异性的感染预防效果，Merck公司的疫苗于2006年取得了FDA和欧洲委员会的认证并上市销售。

如上述，如果用HPV的L1-病毒壳体免疫动物，则会诱导出极其基因型特异性的免疫应答。使用16型L1-病毒壳体疫苗进行的临床实验的中间成绩显示对16型的感染的预防有效性，但也显示对于其它基因型基本上没有预防效果。因此，为了用疫苗阻止子宫颈癌的发病，至少必须开发出能够抗所有高危型的疫苗抗原。

目前为止，本发明人等已经开发出了利用存在于HPV16型L2蛋白质的氨基酸108-120区域的高危型共有中和表位的疫苗抗原。但是，该表位的氨基酸序列在高危型L2蛋白质间显示约60～75％左右的同源性，诱导出的抗体虽然能与多种高危型HPV相结合，但与HPV16型相比结合能力低下。因此，希望有基因型共有性更高的抗原。

本发明人等发现：通过将HPV16型L2蛋白质的氨基酸64-81区域附加在HPV16L1蛋白质上而得到嵌合蛋白质，能够制作诱导更强力的基因型共有中和抗体的疫苗抗原，该疫苗抗原是至少能够抗所有高危型的抗原，而且是基因型共有性更高的抗原，并申请了在先专利(WO2007/018049，专利文献1)。而且，在专利文献1中，如上述，考虑到在HPV16L1蛋白质中插入HPV16型L2蛋白质的氨基酸108-120区域而得到嵌合蛋白质，基于该嵌合蛋白质的粒子具有强免疫原性和高危HPV群共有的中和抗体诱导能力，还提供在上述附加了氨基酸64-81区域的嵌合蛋白质的基础上插入HPV16型L2蛋白质的氨基酸109-117区域而得到的嵌合蛋白质。