[发明专利]细胞毒性抗LAG-3单克隆抗体及其在治疗或预防器官移植排斥和自身免疫病中的用途

说明书

本发明涉及结合LAG‑3蛋白并导致LAG‑3⁺活化T细胞被清除的分子，特别地所述分子是细胞毒性抗LAG‑3单克隆抗体或其片段。还涉及治疗或预防哺乳动物中器官移植排斥或自身免疫病的方法，包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的所述抗体。

技术领域

本发明属于免疫治疗领域。更具体地，其涉及治疗或预防器官移植排斥或治疗自身免疫病。本发明涉及结合LAG-3蛋白并导致LAG-3⁺活化T细胞被清除的分子。更具体地，其涉及细胞毒性LAG-3特异性单克隆抗体或其片段。

背景技术

淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3，LAG-3，CD223)在T细胞活化早期上调。本发明基于对急性心脏同种异体移植排斥(体内动物研究)中和体外实验中抗LAG-3细胞毒性抗体作用的分析，其中所选LAG-3单克隆抗体在低剂量下(＜0.1μg/ml)有效清除LAG-3⁺活化的效应T细胞。

选择性清除活化T淋巴细胞可代表免疫抑制性诱导治疗，其能够导致支持小鼠和灵长类动物中同种异体器官长期存活的调节性细胞发育(1)。事实上，这已通过抗CD40L抗体得到了证实，该抗体通过Fc依赖性机制在体内清除活化T细胞(2)。然而，抗CD40L抗体还靶向人的活化血小板，并影响动脉血栓的稳定性(3)。因此，促使尝试开发特异性针对T细胞活化的其它分子的单克隆抗体，以实现免疫抑制。一种这样的分子是LAG-3，其以高亲合力募集树突细胞(DC)上的II型分子，使得DC活化(4-6)。LAG-3蛋白在体内表达于位于发炎的次级淋巴器官或组织中(但不在脾、胸腺或血液中)活化的CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞中(7)。另外，LAG-3可通过抑制初级活化的早期事件而用作活化的人CD4和CD8T细胞的负调控因子(8)。

发明内容

本发明提供一种结合LAG-3蛋白并导致LAG-3⁺活化T细胞被清除的分子。所述清除可通过组织或器官中外周血淋巴细胞数的变化来测量。

在一个优选实施方案中，所述结合LAG-3蛋白的分子是导致LAG-3⁺活化T细胞被清除的细胞毒性抗LAG-3单克隆抗体或其片段，所述抗体包含来自人IgG1或IgM(或小鼠IgG2a)亚类的Fc片段以及结合LAG-3蛋白的Fab片段，所述抗体表现补体依赖性细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

本发明还提供了用于治疗或预防器官移植排斥或治疗自身免疫病的方法。所述方法包括向哺乳动物对象施用治疗有效量的细胞毒性抗LAG-3单克隆抗体或其片段。

附图说明

图1：LAG-3mRNA在心脏同种异体移植(A)、脾(B)和淋巴结(C)中的表达。利用定量RT-PCR测量心脏移植物在第5天时的LAG-3mRNA表达，并与看家基因HPRT转录物的表达进行比较。排斥：未进行处理的同种异体移植。同基因：同基因移植。耐受：接受致耐受性处理(CsA+抗CD28抗体)的受体中的同种异体移植。^＊＊：针对同基因和耐受对比排斥，p＜0.05。

图2：在补体依赖性细胞毒性测定中表征抗LAG-3抗体。用⁵¹Cr标记经ConA刺激的靶细胞，并与兔补体和抗LAG-3血清(实线)或免疫前血清(虚线)以所示稀释度进行混合。如下计算细胞毒性百分比：(该测定的CPM-自发CPM释放)/细胞裂解后所获得的最大释放CPM。

图3：抗LAG-3抗体的体外清除活性。用ConA使来自脾的T细胞活化48小时以诱导LAG-3的表达，并用CFSE进行标记。向已在3天前接受辐照(4.5Gy)的受体静脉内注射10⁵个细胞。注射后24小时，处死受体，并通过流式细胞术分析脾的CD4⁺和CD8⁺区室中CFSE⁺细胞的存在情况。