[发明专利]用于治疗癌症和其他血管生成相关疾病的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2007年6月6日提交的美国临时申请60/958,519、2007年8月24日提交的美国临时申请60/966,085以及2008年6月12日提交的美国临时申请61/131,876的优先权。

发明领域

本发明属于分子生物学和医学领域并且涉及用于调控血管生成素/Tie2信号转导途径中的分子的表达的短干扰RNA(siRNA)分子。

发明背景

血管生成素/Tie2信号转导途径牵涉几种类型的癌症诱导的血管生成。已鉴定了Ang-Tie途径中的几种分子(参见，例如，表1和13)。其中之一是几乎只在血管内皮细胞(EC)的表面上表达的受体分子Tie2(具有免疫球蛋白和EGF因子同源结构域的酪氨酸激酶，也称为TIE-2、TEK或上皮特异性蛋白质受体酪氨酸激酶、TEK酪氨酸激酶)(Sato等人，1998，Int.Immunol.10：1217-1227)。结合Tie2的配体包括血管生成素-1和血管生成素-2(Yancopoulos等人，2000，Nature 407：242-248)。

表1.血管生成素/T i e2途径的基因序列ID

因此，存在对靶向Ang-Tie途径的治疗剂的紧迫需要。

发明概述

本发明的一个方面提供了减少血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)或具有免疫球蛋白和EGF因子同源结构域的酪氨酸激酶(Tie2)基因的表达的核酸分子，其中所述核酸分子包含或靶向SEQ ID NO：1-648中的任一个。本发明还提供了减少Ang-2基因的表达的核酸分子，其中所述核酸分子包含或靶向SEQ ID NO：487、489、525、526、553、554、639、640、643和644中的任一个。在特定的实施方案中，所述核酸分子是短干扰RNA(siRNA)分子。在优选实施方案中，本发明提供了具有平端的25个碱基对的siRNA。

本发明还提供了包含核酸分子和药学上可接受的载体的组合物，所述核酸分子包含或靶向SEQ ID NO：1-648中的任一个。在一个实施方案中，组合物还包含组氨酸-赖氨酸共聚物。在另外的实施方案中，组合物还包含靶向性部分(targeting moiety)。组合物还可包含一种或多种另外的治疗剂。

本发明还提供了靶向多个致病基因或靶向相同基因内的不同序列的核酸分子的组合。在一个方面，本发明提供了组合物，所述组合物包含含有或靶向SEQ ID NO：1-648中的任一个的核酸分子并且还包含一种或多种诱导RNA干扰和减少目的基因表达的另外的核酸分子。在一个实施方案中，一种或多种另外的核酸分子减少Ang-1、Ang-2或Tie-2的表达。

本发明还提供了用于减少Ang-1、Ang-2或Tie-2基因在细胞中的蛋白质水平的表达的方法，该方法包括将本发明的任何核酸分子或siRNA分子导入细胞。本发明还提供了在有此需要的受试者中减少血管生成的方法，该方法包括对所述受试者施用本发明的任何核酸分子、siRNA分子或组合物。此外，本发明还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括对所述受试者施用本发明的任何核酸分子、siRNA分子或组合物。

在参考下列详细描述后，本发明的这些和其他方面将变得明显。

附图概述

图1是描述在siRNA转染后24小时，在人脐静脉内皮(HUVEC)细胞中siRNA分子对人Ang-2的体外抑制的条形图。

在HUVEC细胞中检测表11中所列的人Ang-2-siRNA序列的沉默人Ang-2基因的活性。x-轴上的标注#1-#48相应于表11中的编号为1-48的siRNA序列。使用基于反向转染的高通量(HTP)方法用Ang-2-siRNA(使用10nM的siRNA双链体)转染HUVEC细胞。萤光素酶特异性25-聚体siRNA用作阴性对照(Luc)。通过使用人Ang-2ELISA试剂盒(R&D)测量培养基中的Ang-2蛋白的浓度来监测siRNA介导的Ang-2抑制(knockdown)的效果。对于48种受试的Ang-2siRNA候选物中的大部分，在转染后24小时，在经转染的HUVEC细胞中观察到Ang-2蛋白质水平的表达的显著抑制。

图2是描述在siRNA转染后48小时，在HUVEC细胞中siRNA分子对人Ang-2的体外抑制的条形图。