[发明专利]可变切向流过滤

说明书

本发明属于蛋白质浓缩领域，更具体而言，其涉及切向流过滤(TFF)用 于免疫球蛋白浓缩的应用。

背景技术

蛋白质、尤其是免疫球蛋白在当前的医药事务中起着非常重要的作用。 用于生产重组多肽的表达系统是本领域公知的并且描述于，例如Marino， M.H.，Biopharm.2(1989)18-33；Goeddel，D.V.等，Methods Enzymol.185 (1990)3-7；Wurm，F.和Bernard，A.，Curr.Opin.Biotechnol.10(1999) 156-159。在制药应用中使用的多肽主要在诸如CHO细胞、NS0细胞、Sp2/0 细胞、COS细胞、HEK细胞、BHK细胞、细胞等的哺乳动物细 胞中生产。

对于人类应用，每种药用物质都必须符合特定的标准。为确保生物药用 物质对人类的安全性，例如，必须移除可能造成严重伤害的核酸、病毒和 宿主细胞蛋白质。为符合质量管理规格标准，在生产步骤之后必须有一个 或多个纯化步骤。除其它因素外，纯度、生产能力和收率在确定合适的纯 化方法中起着重要的作用。

由于它们的化学和物理性质，诸如分子量和结构域构造(包括二级修 饰)，免疫球蛋白的下游加工非常复杂。例如，不仅对于配制的药物，而且 对于下游加工(DSP)的中间产品，都需要浓缩溶液以实现用于经济处理和应 用贮存的低体积。此外，短的浓缩时间对于确保顺利加工和短的操作时间 都是有利的。就此方面，不完善的TFF方法(尤其是最终纯化步骤后的)可 以引起持久的损害，甚至影响药物产品。Ahrer，K.，等(J.Membr.Sci.274 (2006)108-115)研究了单克隆抗体(mAb)中间溶液的切向流浓缩过程中切 变应力和聚集之间的关系。监测了浓缩时间及所选择的流和压力对方法性 能和聚集状态的影响(例如，参加Dosmar，M.等，Bioprocess Int.3(2005) 40-50；Luo，R.等，Bioprocess Int.4(2006)44-46)。

Mahler，H.-C.等(Eur.J.Pharmaceut.Biopharmaceut.59(2005) 407-417)报道了在通过不同的搅拌应力方法形成的液体IgG1-抗体制剂中 聚集的诱导和分析。在US 6,252,055中，报道了浓缩的单克隆抗体制备物。 用于生产浓缩抗体制备物的方法报道于US 2006/0182740。 US 2006/0051347报道了包括超滤、渗滤和二次超滤序列的联合方法。在 EP 0 907 378中报道了应用具有250ml/分钟的固定再循环速率的横向流 (cross-flow)超滤浓缩抗体制备物的方法。US 2004/0167320报道了切向流过 滤的方法以及用于其的设备。WO 97/45140报道了浓缩的抗体溶液。

发明概述

本发明提供了用于浓缩含有重组生产的免疫球蛋白的溶液的方法。

更具体地，本发明的一个方面是通过切向流过滤浓缩免疫球蛋白溶液的 方法，其中所施加的跨膜压力和横向流是可变的：

a)在待浓缩溶液最高达每ml 30mg免疫球蛋白的浓度范围中，1.4巴 (bar)至1.6巴的跨膜压力和75ml/分钟至90ml/分钟的横向流，

b)在15mg/ml至高达55mg/ml的浓度范围中，0.8巴至0.9巴的跨膜 压力和140ml/分钟至160ml/分钟的横向流，以及

c)在超过45mg/ml的浓度范围中，0.8巴至0.9巴的跨膜压力和120ml/ 分钟至140ml/分钟的横向流。

在一个实施方案中，步骤c)中的浓度范围是50mg/ml至高达275mg/ml。 在优选的实施方案中，步骤c)中的浓度范围是50mg/ml至高达180mg/ml。 在更优选的实施方案中，步骤c)中的浓度范围是50mg/ml至高达130 mg/ml。在另一实施方案中，步骤a)中的跨膜压力和横向流是1.5巴和80ml/ 分钟，步骤b)中是0.85巴和150ml/分钟，和/或步骤c)中是0.85巴和130ml/ 分钟。在另一实施方案中，免疫球蛋白溶液是缓冲的、水性(aqueous)免疫 球蛋白溶液。

本发明的另一方面是用于生产异源免疫球蛋白的方法，其包括下述顺序 的以下步骤：

a)提供重组哺乳动物细胞，其包含一种或多种编码异源免疫球蛋白的 核酸；