[发明专利]体内扩增人类肝细胞的方法

权利要求书

1.用于体内扩增人类肝细胞的方法，包括

1)将分离的人类肝细胞移植到Rag2^-/-/Il2rg^-/-小鼠中，其中小鼠的Fah表达缺陷；

2)使人类肝细胞扩增至少大约2周；以及

3)从小鼠收集人类肝细胞。

2.权利要求1的方法，其中小鼠对Fah基因中的缺失是纯合的。

3.权利要求2的方法，其中小鼠是Fah^-/-/Rag2^-/-/Il2rg^-/-(FRG)小鼠。

4.权利要求1的方法，其中小鼠对Fah基因中的点突变是纯合的。

5.权利要求4的方法，其中小鼠是Fah^pm/Rag2^-/-/Il2rg^-/-(F^pmRG)小鼠。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中在注射人类肝细胞之前，将编码人类尿激酶的载体施用于小鼠。

7.权利要求6的方法，其中尿激酶是分泌形式的尿激酶。

8.权利要求6的方法，其中尿激酶是非分泌形式的尿激酶。

9.权利要求6-8任一项的方法，其中载体是腺病毒载体。

10.权利要求6-8任一项的方法，其中载体是腺相关病毒载体。

11.权利要求6-10任一项的方法，其中载体经静脉内施用。

12.权利要求6-11任一项的方法，其中载体在肝细胞注射前大约24到48小时施用。

13.权利要求1-12任一项的方法，其中在肝细胞注射之前，对小鼠施用2-(2-硝基-4-三氟甲基-苯甲酰基)-1，3环己二酮(NTBC)。

14.权利要求13的方法，其中NTBC以大约0.05mg/kg/天到大约0.10mg/kg/天的剂量施用。

15.权利要求13或权利要求14的方法，其中小鼠在肝细胞注射后，还施用NTBC至少大约3天。

16.权利要求13或权利要求14的方法，其中小鼠在肝细胞注射后，还施用NTBC至少大约6天。

17.权利要求16的方法，其中在肝细胞注射后，NTBC的剂量在6天的时间期间中逐渐减少。

18.权利要求13-17任一项的方法，其中NTBC在饮用水中进行施用。

19.权利要求18的方法，其中在肝细胞注射前在饮用水中进行施用的NTBC的浓度是大约1到大约8mg/L。

20.权利要求13-17任一项的方法，其中NTBC在食物中进行施用。

21.权利要求13-17任一项的方法，其中NTBC通过注射施用。

22.权利要求1-21任一项的方法，其中使人类肝细胞扩增至少大约6周。

23.权利要求1-21任一项的方法，其中使人类肝细胞扩增多达大约6个月。

24.权利要求1-23任一项的方法，其中分离的人类肝细胞被注射到小鼠的脾脏或门静脉中。

25.权利要求1-24任一项的方法，其中扩增的人类肝细胞从小鼠的肝脏收集。

26.权利要求1-25任一项的方法，其中人类肝细胞从器官供体的肝脏分离，从外科切除术分离，或源自于干细胞、单核细胞或羊水细胞。

27.权利要求26的方法，其中肝细胞在注射前超低温保藏。

28.权利要求1-27任一项的方法，还包括在肝细胞注射前从FRG小鼠消除巨噬细胞。

29.权利要求28的方法，其中消除巨噬细胞包括化学消除。

30.权利要求28的方法，其中消除巨噬细胞包括使用特异性结合巨噬细胞的抗体。

31.权利要求1-30任一项的方法，还包括通过连续移植扩增所收集的人类肝细胞。