[发明专利]用于扩增核酸的方法和组合物

权利要求书

1.一种扩增样品中的核酸序列的方法，所述方法包括：

提供一种包含靶核酸序列和PCR抑制因子的样品；

将至少一种高稳定性引物和靶核酸序列混合，其中所述高稳定性引物包含至少一种高稳定性核酸类似物；和

对所述样品实施扩增反应，由此通过所述高稳定性引物扩增所述靶核酸序列。

2.权利要求1的方法，其中所述靶核酸序列包括DNA。

3.权利要求1的方法，其中通过PCR实现扩增。

4.权利要求1的方法，其中所述高稳定性核酸类似物选自：PNA、LNA、2′-O-甲基核酸、2′-O-烷基核酸、2′-氟代核酸、包含硫代磷酸酯键的核酸及其任意组合。

5.权利要求4的方法，其中所述高稳定性核酸类似物包括LNA。

6.权利要求1的方法，其中所述高稳定性引物包括至少2种高稳定性核酸类似物。

7.权利要求1的方法，其中所述方法包括提供至少2种高稳定性引物。

8.权利要求1的方法，其中所述方法包括提供至少5种高稳定性引物。

9.权利要求1的方法，其中所述高稳定性引物具有比第二种引物高的熔点温度，所述第二种引物除了以下两点之外与所述高稳定性引物相同：a)所述第二种引物由天然核酸组成，和b)包括代替高稳定性核酸类似物的对等天然核酸。

10.权利要求1的方法，其中所述PCR抑制因子选自：腐殖酸、胆盐、复合多糖、胶原、亚铁血红素、黑色素、真黑素、肌红蛋白、多糖、蛋白酶、钙离子、尿素、血色素、乳铁蛋白、免疫球蛋白G和靛青染料。

11.权利要求1的方法，其中用高稳定性引物的所述扩增扩增至少一个基因座的核酸序列，所述基因座选自：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、D19S433和D2S1338。

12.权利要求1的方法，其中用高稳定性引物的所述扩增扩增至少一个基因座的核酸序列，所述基因座选自：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818和D7S820。

13.一种鉴定个体的靶核酸序列的方法，所述方法包括：

提供一种样品，其中所述样品处于据信被可抑制核酸扩增的组分污染的位置，其中所述样品包含来自个体的靶核酸序列；

使用至少一种高稳定性引物扩增所述个体的靶核酸序列，其中所述高稳定性引物包含至少一种高稳定性核酸类似物，其中所述引物可以扩增至少一个基因座的序列，所述基因座选自：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、D19S433、D2S1338或其组合，其中所述引物进一步包含迁移率调节物；和

表征扩增的靶核酸序列，由此鉴定扩增的靶核酸序列。

14.权利要求14的方法，其中所述高稳定性核酸类似物包含LNA。

15.一种用于人类鉴定的引物，所述引物具有与至少一个基因座的序列互补的序列，所述基因座选自：CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、D19S433和D2S1338，其中所述引物中的至少一种核酸为高稳定性核酸类似物。

16.权利要求15的引物，其中所述引物进一步包含迁移率调节物。

17.权利要求16的引物，其中所述迁移率调节物选自：聚环氧乙烷、聚乙醇酸、聚乳酸、多肽、寡糖、聚氨酯、聚酰胺、聚磺酰胺、聚亚砜、聚膦酸酯及其嵌段共聚物。

18.一种用于PCR反应的试剂盒，所述试剂盒包括：

三磷酸脱氧核苷酸；

荧光标记的引物；

包含至少一种高稳定性核酸类似物的高稳定性引物；和

DNA聚合酶。