[发明专利]优化的重组生长因子蛋白纯化方法

权利要求书

1.用于生产纯化的重组GDF-5相关蛋白的方法，其包括细菌细胞破坏和包含体溶解的步骤，以获得溶解的GDF-5相关蛋白的单体，所述方法的特征在于

a)使用高压均质机在800至900巴的破坏压力下破坏细菌细胞；如/或

b)用含有L-精氨酸的变性溶解缓冲液处理回收的包含体。

2.根据任一项在前权利要求的方法，其中溶解缓冲液含有4-8M脲和400-500mM精氨酸，尤其是6M脲和500mM精氨酸。

3.根据任一项在前权利要求的方法，其中溶解缓冲液含有浓度为5至100mM的螯合剂。

4.根据任一项在前权利要求的方法，其中溶解缓冲液的特征在于9.0至11.0的pH。

5.根据任一项在前权利要求的方法，进一步包括在包含体溶解步骤后通过应用选自离心、深度过滤和无菌过滤的一种或多种手段直接除去高分子量杂质。

6.根据任一项在前权利要求的方法，进一步包括通过渗滤从含有溶解的包含体蛋白的溶液中除去所述L-精氨酸。

7.根据任一项在前权利要求的方法，其中在包含体中表达GDF-5相关蛋白的宿主菌株是大肠杆菌菌株，优选选自大肠杆菌D1210和大肠杆菌W3110。

8.根据任一项在前权利要求的方法生产的GDF-5相关蛋白。

9.根据在前权利要求的蛋白，其包括SEQ ID NO：3所示序列的氨基酸1至119或1至120(人成熟GDF-5)。

10.根据权利要求8的蛋白，其包括SEQ ID NO：1所示序列的氨基酸400至501(人GDF-5的半胱氨酸结结构域)。

11.根据权利要求8的蛋白，其包括SEQ ID NO：4所示序列的氨基酸1至119或1至120(人成熟单体GDF-5)。

12.含有脲和L-精氨酸的溶液用于溶解细菌包含体以获得其中所含的溶解的GDF-5相关蛋白单体的用途。