[发明专利]具有酶许可量显像剂的试剂盒、制剂和溶液及其用途

说明书

发明领域

本发明涉及与纤维蛋白原反应时能形成纤维蛋白的蛋白水解酶组 合物、纤维蛋白胶试剂盒和纤维蛋白胶制剂，其包含酶许可浓度的显 像剂。

发明背景

纤维蛋白胶通常是来自商业来源或某些地区输血中心的血液制 品。制备纤维蛋白胶中通常使用的成分有纤维蛋白原、凝血酶、因子 VIII、因子XIII、纤连蛋白、玻连蛋白和血管假性血友病因子(vWF)。

纤维蛋白胶通过酶反应形成，所述酶反应尤其涉及纤维蛋白原、 凝血酶和因子XIII。凝血酶通过酶促作用将纤维蛋白原转化成纤维蛋 白，其速率由凝血酶的浓度决定。因子XIII是通常存在于胶的纤维蛋 白原成分，是交联和稳定纤维蛋白块的血液凝固系统的酶。该过程绕 过了大部分常规凝固步骤，仅模拟了其最后时期。某些厂商在纤维蛋 白胶制剂中添加了抗蛋白水解剂(如WO-A-93/05822中所述)或特别 除去纤溶酶原以阻止或延迟纤维蛋白溶解(如US-B-5,792,835和 US-B-7,125,569中所述)。

已报道了纤维蛋白胶在各种医学领域的众多应用，包括用作封闭 剂、止血剂、抗粘连剂以及用于多种腹腔镜手术中。然而，纤维蛋白 胶产生透明膜，其在照明较佳的开放性手术中较为明显，但在某些腹 腔镜手术中则可能不被注意。因此，使用染色的纤维蛋白胶，使用户 在手术期间能够评价所用材料的厚度并改善其可见度是有利的。

US-B-7,009,034公开了适于包被患者组织的组合物，包括聚合物、 保留在交联的聚合物中的小分子“交联剂”和显像剂。公开的聚合物可以 是合成或天然的。US-B-7,009,034中提到的天然聚合物有胶原、纤维蛋 白原、白蛋白，以及纤维蛋白、多糖或葡萄糖胺聚糖。US-B-7,009,034 的说明书未涉及因子XIII和/或凝血酶。实施例显示，向US-B-7,009,034 的组合物中添加1.25％高浓度的显像剂未引起胶凝时间任何不可接受 的变化。根据说明书，可使用比1.25％更高的浓度，直至显像剂在最 终混合物中溶解度的极限。

以下专利申请并未公开或提示染料的添加对凝血酶活性的任何不 希望的效应。

US-A-2003/0077272公开了具有显像剂的蛋白胶。所公开的是包含 纤维蛋白原、凝血酶和保留在交联聚合物中的小分子“交联剂”的凝胶。 几乎没有实施例提到使用水凝胶和通过凝血酶形成纤维蛋白粘连的纤 维蛋白原和因子XIII组合物的可能制剂。这些实施例公开了向纤维蛋 白原溶液中加入的荧光染料浓度为0.0002-0.02％，未说明纤维蛋白原 与凝血酶溶液混合后的纤维蛋白胶中的最终浓度。

US-A-2005/0049178公开了用于血管阻塞的试剂，其包含生理学安 全的染料。该染料使得栓塞的血管染色。优选的试剂是液态纤维蛋白 原溶液，其可与液态凝血酶制剂和因子XIII联用。该专利申请没有公 开染料的任何特定浓度。

JP-A-2002104996公开了止血组合物，其包含活性成分(如凝血酶) 和可避免内科治疗中误用(即局部施用和注射之间的混淆)的着色剂。 该染料在组合物中的范围很宽，为0.0001至1％。

WO-A-91/04073公开了光动力学疗法，其利用诸如染料的能量吸 收材料和诸如纤维蛋白原或纤维蛋白胶的接合剂以完成组织的接合。 根据该发明，染料是化学活性成分，仅当使用能源诸如激光将足够的 能量传递至所述能量吸收材料上时发生接合。

US-A-5,292,362涉及包括至少一种天然或合成肽和至少一种支持 物的组合物，所述支持物可被能量激活形成键或涂层。在可用作该组 合物第一成分的许多肽中提到纤维蛋白原和凝血酶。第二成分通过对 第一成分分子间相互关系的改良有助于第一成分。根据说明书，所述 组合物还可包括内源或外源性发色团。染料在该组合物中的范围较宽， 为基于所述组合物总重量的约0.01％至50％重量。

发明概述

纤维蛋白胶日渐用于手术中以减少出血和粘连，封闭或填充表面 和/或改善伤口愈合。目前的纤维蛋白胶制剂是无色的，因此将所述制 剂应用至渗出(oozing)位置是难以控制的。加入显像剂改善了纤维蛋 白胶的应用靶向质量，例如简化了应用区域的定位，使用户能评价所 用材料的厚度并改善其可见度。然而，根据本发明已发现向纤维蛋白 胶制剂中加入提高浓度的显像剂会影响凝血酶的活性。