[发明专利]选择具有特异性突变的植物的方法

权利要求书

1.一种在植物中引入并选择特异性突变的方法，包括以下步骤：

(a)提供多个诱变的种子；

(b)将诱变的种子种植于N-维网格，其中N≥1；

(c)从种子长出植物；

(d)从植物的一个部分提取含DNA的材料的样品；

(e)汇聚N-维网格的N维中的第一维中含DNA的材料成库；

(f)从库中分离DNA；

(g)对于植物的不同部分对于N-维网格的任何第二维和更多维重复步骤(d)-(f)；

(h)以一组引物扩增汇聚的DNA，所述引物扩增含有感兴趣突变位置的DNA(的一部分)，其中引物中至少一个含有库-特异性标签，以获得每个库的反应产物；

(i)汇聚反应产物成库；

(j)确定反应产物的核苷酸序列；

(k)使用库-特异性标签将来自步骤(h)的库的序列去卷积以鉴定网格中每个植物；并且

(l)选择在N个取样部分中的至少N-1个，优选每个部分中携带所需突变的植物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所选择的植物生长并且突变的遗传性在接下来的世代中得到确认。

3.根据权利要求1所述的方法，其中N选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，优选为2、3、4、5、6，更优选为3。

4.根据权利要求1所述的方法，其中植物的部分选自花、叶、枝、茎、花粉或植物位于地面以上的其它部分及其组合。

5.根据权利要求4所述的方法，其中部分是叶或花，优选为真叶。

6.根据权利要求1所述的方法，其中对于网格的第一维，部分是第一朵花或第一个真叶；对于第二维，部分是第二个真叶；对于第三维，部分是第三个真叶。

7.根据权利要求1所述的方法，其中多个种子是指至少100个种子，更优选为至少1000个种子，再更优选为至少5000个种子。

8.根据权利要求1所述的方法，其中诱变试剂是化学的或物理的诱变试剂。

9.根据权利要求1所述的方法，其中化学试剂选自EMS，DMS，ENU，MNU，PRC，DEB，MMS，苯丁酸氮芥，美法仑，叠氮钠，溴乙锭，溴尿嘧啶，溴酸或亚硝酸。

10.根据权利要求1所述的方法，其中物理诱变试剂为离子化辐射例如UV射线，放射活性阿尔法或伽马射线。

11.根据权利要求1所述的方法，其中标签是核苷酸标签，含有至少4个核苷酸，优选位于引物的5’末端。

12.根据权利要求1所述的方法，其中测序是基于高通量的测序。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所选择的植物对应于所需要的表型的存在或不存在。

14.根据权利要求1-12的方法获得的诱变的群体。

15.方法在植物育种中的用途。

16.一种携带通过以上方法诱导并选择的突变的种子。