[发明专利]原位杂交以检测RNA和DNA标记

权利要求书

1.一种检测细胞中mRNA和染色体DNA的方法，所述方法包括：

在允许第一探针与靶细胞中其mRNA靶标特异性杂交，和第二探针与靶细胞中其染色体DNA靶标特异性杂交的条件下，使所述第一探针和所述第二探针与含有一种或多种靶细胞的生物学样品原位杂交，

其中所述第一探针的Tm至少约80℃，或者，GC含量至少约40％。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针是所述靶细胞的mRNA标记的探针。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶细胞是胎儿细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针是胎儿细胞的mRNA标记的探针。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针是选自下组的胎儿细胞mRNA标记的探针：ε-血红蛋白mRNA；ζ-血红蛋白mRNA；γ-血红蛋白mRNA；Y染色体特异性锌指蛋白mRNA(ZFY-mRNA)；胎儿甲胎蛋白(AFP)mRNA；γ-谷氨酰-转肽酶(GGT)mRNA；人胎盘催乳素1、2、3和4(hPL，aka PLAC-1-4)mRNA；妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)mRNA；促肾上腺皮质素释放因子(CRH)mRNA；组织因子通道抑制剂2(TFPI-2)mRNA；KISS-1转移-抑制剂mRNA；和PLAC-1 mRNA；妊娠特异性β-1-糖蛋白-2、3、4、5、6、7和9mRNA；绒毛膜生长催乳激素2和变体(v1、v2、v3、v4、v5)mRNA；生长激素变体mRNA；α-解聚素和金属蛋白酶结构域变体mRNA；二肽基肽酶7mRNA；衰老关键蛋白mRNA；s100钙结合蛋白mRNA；前列腺分化因子mRNA；和细胞色素P450，亚家族xixmRNA。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针包含一个或多个修饰的核苷酸。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针包含至少约30％修饰的核苷酸。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针包含选自下组的一个或多个修饰的核苷酸：锁定核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、含有2’-OMe核苷酸的核酸、含有膦酸甲酯的核酸、含有硫代磷酸酯的核酸、含有吗啉子基的核酸和它们的组合。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针包含约20-约50个核苷酸。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用可检测实体标记所述第一探针。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用生物素标记所述第一探针。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二探针是用于原位杂交的荧光标记探针。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物学样品是血液或宫颈粘膜样品。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶细胞是胎儿的胎儿细胞，所述生物学样品是胎儿的母体宿主的血液样品。

15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶细胞是胎儿的胎儿细胞，所述生物学样品是从胎儿的母体宿主获得的胎儿细胞富集样品。

16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶细胞是肿瘤细胞。

17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，生物学样品中的细胞经处理而适于原位杂交。

18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在室温下，用PBS配制的约4％低聚甲醛处理生物学样品中的细胞至少30分钟。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一探针和所述第二探针先在变性条件下与生物学样品温育再进行杂交。

20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述条件包括在约37℃-约45℃杂交约4小时-约14小时。

21.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一探针和第二探针的杂交后实施洗涤过程，所述洗涤过程包括在从室温到80℃不等的温度下洗涤。