[发明专利]由法医样品回收精子核酸的方法

权利要求书

1.一种由含有混合的精细胞和上皮细胞以及含杂质的细胞悬浮液的样品中选择性回收精细胞的DNA的方法，所述杂质包含污染的残留DNA，所述方法包括以下步骤：

在第一个分离步骤中从所述悬浮液中分离混合的细胞；

选择性裂解精细胞；和

由裂解的精细胞回收DNA；

其中所述方法包括以下的至少一个步骤：

(a)在所述第一个分离步骤之前通过将样品与第一种洗涤溶液混合从而洗涤所述样品，由此将残留DNA与细胞表面解离；和

(b)在第二个分离步骤中用第二种洗涤溶液洗涤第一分离步骤的混合细胞，接着将洗涤的混合细胞和第二种洗涤溶液分离，之后进行所述裂解步骤。

2.权利要求1的方法，其中所述第一种洗涤溶液或第二种洗涤溶液或这二种洗涤溶液独立地包含一种以下洗涤溶液或它们的组合：阳离子盐、MgCl₂、KCl、NaCl、聚阴离子、聚阳离子和DNA酶。

3.权利要求2的方法，其中所述DNA酶的浓度为0.01U至50U。

4.权利要求1的方法，其中所述细胞在所述第一个或第二个分离步骤或这两个分离步骤中通过磁性粒子、大小排阻过滤或离心分离。

5.权利要求1的方法，所述方法还包括将回收的核酸纯化至一定纯度，所述纯度足以获得适于基因分型的精子STR谱。

6.权利要求4的方法，其中所述细胞在所述第一个分离步骤中通过磁性粒子分离，并在所述第二个分离步骤中通过离心分离。

7.权利要求4的方法，其中所述第一个分离步骤和第二个分离步骤中的至少一个步骤包括：

在容器中混合磁性粒子和样品；

对容器施加磁场，使粒子按所述磁场的方向移动，由此隔离细胞和样品；和

从细胞悬浮液分离出细胞。

8.权利要求7的方法，其中所述裂解步骤包括：

中止对容器施加磁场；和

将选择性精子裂解缓冲液与细胞及磁性粒子混合，由此形成含有精子DNA的裂解物。

9.权利要求8的方法，其中所述回收步骤包括：

对容器施加磁场，由此将粒子和残留的细胞与裂解物隔离；和回收含有精子DNA的裂解物。

10.权利要求7的方法，其中所述第二个洗涤步骤(b)包括：

中止对样品施加磁场；

将第二种洗涤溶液和混合的细胞混合；

对样品再施加磁场，由此隔离细胞；和

从样品中分离出细胞。

11.一种由含有混合的精细胞和上皮细胞以及含杂质的细胞悬浮液的样品中选择性回收精细胞的DNA的方法，所述杂质包含污染的残余DNA，所述方法包括以下步骤：

将样品加入至大小排阻滤器上，所述样品任选地包含第一种洗涤溶液；

在第一个分离步骤中通过将细胞隔离在滤器上，并使细胞悬浮液形成滤过液，从而分离混合细胞和细胞悬浮液；

选择性裂解精细胞；和

由精细胞回收DNA；

其中所述方法包括以下步骤中的至少一个步骤：

通过将样品与第一种洗涤溶液混合洗涤样品，形成洗涤过的样品，由此解离或消化细胞表面上的残余DNA，之后将样品加入至大小排阻滤器上；

在第二个分离步骤中用第二种洗涤溶液洗涤分离的混合细胞，接着分离洗涤后的混合细胞和第二种洗涤溶液，之后进行所述裂解步骤。

12.权利要求11的方法，其中所述第一种洗涤溶液或第二种洗涤溶液或这两种洗涤溶液独立地包含一种以下洗涤溶液或它们的组合：阳离子盐、MgCl₂、KCl、NaCl、聚阴离子、聚阳离子和DNA酶。

13.权利要求12的方法，其中所述DNA酶的浓度为0.01U至50U。

14.权利要求11的方法，所述方法还包括纯化回收的核酸至一定纯度，所述纯度足以获得适于基因分型的精子STR谱。