[发明专利]包含抗原、两性化合物和疏水载体的组合物及其应用

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2007年10月3日提交的美国临时专利申请号 60/977,197的权益和优先权，其通过引用全部并入本文。

发明领域

本发明涉及包含抗原、两性化合物和疏水载体的组合物。已发现本 发明的组合物提供增强的体内免疫反应。

发明背景

接种疫苗通常涉及将抗原性物质或抗原注射入动物。抗原性物质在 动物中产生免疫反应。抗原可以是例如死的生物体，例如细菌或灭活的 病毒，具有抗原性质的生物体组分，具有低毒力的存活的生物体或病毒。

抗原在刺激免疫反应中的效力可以通过施用佐剂增强。佐剂可通过 不同机制发挥功能，包括(1)在机体内捕获抗原引起缓慢释放，(2) 将免疫系统的细胞吸引至注射位点，(3)刺激免疫系统的细胞增殖并被 激活，以及(4)改进接受者体内抗原扩散。通常使用的佐剂包括铝盐、 油包水乳液和水包油乳液、矿物盐和其他可作为刺激性危险信号的化合 物。在一些情况下，聚阳离子例如二乙氨乙基葡聚糖(DEAE葡聚糖) 也可作为佐剂发生效力。佐剂可以作为添加剂包含在疫苗中或可以分别 施用。

许多疫苗组合物是油包水或水包油乳液。具体地，油包水组合物 是有效的，原因在于这种组合物在注射位点存在时间延长，这引起抗 原在免疫位点的缓慢释放。但是，一旦体内注射，油包水乳液可变得 不稳定，引起组合物水相和油相分离。这引起抗原和其他组分的过早 成熟或加速释放。

发明概述

一方面，本发明提供组合物，其包含：抗原、两性化合物和疏水载 体，其中所述组合物基本上无水。

另一方面，本发明提供制备如上所述组合物的方法，所述方法包括： (a)将抗原和两性化合物组合以形成干燥混合物；以及(b)在疏水载 体中悬浮所述混合物；其中所述组合物基本上无水。

另一方面，本发明提供包括将如上所述的组合物施用至对象的方法。

另一方面，本发明提供在对象中诱导抗体反应或细胞介导的免疫 反应的方法，所述方法包括将如上所述组合物施用至需要其的对象。

附图简述

图1图示了根据本发明，移植C3细胞以及在肿瘤移植8天后用磷酸 盐缓冲液处理的小鼠中在42天时期内的肿瘤生长。移植C3细胞的对照 小鼠(组1，n＝10)显示在42天时期中正常肿瘤生长。该组中的所有小 鼠在肿瘤移植8天后(肿瘤植入后，PTI)用磷酸盐缓冲液处理。

图2图示了移植C3细胞并在第8天用由油包水乳液中的FP抗原组 成的对照制剂处理的小鼠中在42天时期内的肿瘤生长。对照小鼠(组2， n＝8)被移植C3细胞并在第8天用由油包水乳液中的FP抗原组成的对 照制剂处理。在全部42天中每周监测肿瘤。

图3图示了移植C3细胞并在第8天用由FP抗原、DOPC载体和疏 水载体(不完全弗氏佐剂)组成的无水组合物处理的小鼠中在42天时期 内的肿瘤生长。小鼠(组3，n＝8)被移植C3细胞并在第8天用由FP抗 原、DOPC载体和疏水载体(不完全弗氏佐剂)组成的无水组合物处理。 在全部42天中每周监测肿瘤。

图4图示了移植C3细胞并在第8天用由油包水乳液中FP抗原和 Pam3Cys佐剂(不完全弗氏佐剂)组成的对照制剂处理的小鼠中的肿瘤 生长。对照小鼠(组4，n＝8)被移植C3细胞并在第8天用由油包水乳 液中FP抗原和Pam3Cys佐剂(不完全弗氏佐剂)组成的对照制剂处理。 在全部42天中每周监测肿瘤。

图5图示了移植C3细胞并在第8天用由FP抗原、Pam3Cys佐剂、 DOPC载体和疏水载体(不完全弗氏佐剂)组成的无水组合物处理的小 鼠中在42天时期内的肿瘤生长。小鼠(组5，n＝7)被移植C3细胞并在 第8天用由FP抗原、Pam3Cys佐剂、DOPC载体和疏水载体(不完全弗 氏佐剂)组成的无水组合物处理。在全部42天中每周监测肿瘤。

图6图示了如下接种的三组小鼠(n＝4)的细胞免疫反应：组1小鼠 用在典型油包水乳液(不完全弗氏佐剂)中的FP接种，组2小鼠用由 FP、DOPC和不完全弗氏佐剂组成的无水制剂接种，以及组3小鼠用由 FP和不完全弗氏佐剂组成的对照无水制剂接种。细胞免疫反应通过 ELISPOT测定进行测量并以斑点形成单位的平均值加以描述。