[发明专利]原代细胞的繁殖及其应用

权利要求书

1.繁殖或富集原代细胞的方法，其特征在于人原代细胞

a.)被分离

b1.)以至少一个增殖基因或其基因产物功能性引入所述细胞和/或

b2.)至少一个引起细胞分裂抑制的细胞因子被失活，

c.)所述细胞是被培养和/或传代并且

d.)被收获，其中所述收获的细胞不具有肿瘤特性。

2.权利要求1的繁殖或富集原代细胞的方法，其中在步骤c.)中出现20到40次传代。

3.权利要求1或2的繁殖或富集原代细胞的方法，其中步骤d.)中所述的收获的细胞不能够在软琼脂中生长或显示出体内肿瘤生长。

4.前述任一项权利要求的繁殖或富集原代细胞的方法，其中所述得到的细胞是非永生化的。

5.权利要求1的繁殖或富集原代细胞的方法，其特征在于步骤b1.)中的所述增殖基因是细胞增殖基因和/或病毒增殖基因。

6.前述任一项权利要求的繁殖或富集原代细胞的方法，其特征在于所述细胞增殖基因选自myc、jun、ras、src、fyg、myb、E2F和Mdm2以及TERT，或所述病毒增殖基因选自乳头瘤病毒的E6和E7，例如，如HPV；多瘤病毒的大和小TAg，例如，如SV40、JK-病毒和BC-病毒；腺病毒蛋白E1A和E1B、来自Epstein-Barr病毒(EBV)的EBNA蛋白；以及HTLV和松鼠猴疱疹病毒。

7.前述任一项权利要求的繁殖或富集原代细胞的方法，其特征在于b.)中所述细胞因子选自p53、p16、pRB、p107、p130或其各自的上游或下游因子或在该通路中结合到其上的蛋白质，并且这些细胞因子的失活是通过显性失活突变体的表达或使用反义寡核苷酸、RNAi分子、吗啉代、核糖酶来抑制这些因子的基因表达，或通过基因敲除，通过特异性抗体、化学抑制剂的来实现的。

8.前述任一项权利要求的繁殖或富集原代细胞的方法，其特征在于所述病毒增殖基因是HPV的E6和E7或BPV，特别是HPV16和HPV18以及HPV 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82和/或HPV6和HPV11，以及HPV 40、42、43、44、54、61、70、72和81。

9.制造化验物的方法，其包括如下步骤：

a.)制备基基质材料，

b.)将权利要求1至少一种收获的细胞固定或定位于所述基质材料上，和

将来自b.)中的该细胞与分析物相接触。

10.权利要求9的制造化验物的方法，其特征在于，所述分析物选自化学物质、药物、活性物质、化妆品、细胞。

11.细胞库，其包括权利要求1到8任一项所述的收获的细胞，所述细胞在固体基质上或在悬浮液中。

12.3D细胞模型或体外组织，包括权利要求1到8任一项所述的收获的细胞，其任选地在固体基质上。

13.起始培养物、共培养细胞或培养物，其包括根据权利要求1到8任一项所述的收获的细胞和常用的添加剂和辅助剂。

14.制药物质，包括根据权利要求1到8任一项权利要求收获的细胞和常用的添加剂和赋形剂，其尤其是用于疾病治疗，特别是变性疾病，例如，心肌功能不全、肝硬化、帕金森病和胰岛素依赖性糖尿病。

15.根据权利要求1到8任一项所述的收获的细胞在产生细胞库、3D细胞模型或体外组织、起始培养物、培养物、共培养细胞、制药物质中的应用。