[发明专利]原代细胞的繁殖及其应用

说明书

本发明涉及繁殖或富集不带有肿瘤特性的原代细胞的方法，及其随后的应用。

提供适用于人类的细胞提出了医学挑战，不论这些细胞是用于体内治疗还是用于开发包括相应的细胞培养物在内的离体细胞体系。而且，迫切需要建立尽可能接近人类细胞的细胞培养物，这些细胞培养物因而可以用于药物测试、研究等。

在现有技术中，已经建立了能够在适当的培养基上无限增殖并且永生的细胞的细胞系。具体而言，肿瘤细胞或肿瘤样细胞，连同以前已知的HeLa细胞——宫颈癌细胞系、COS细胞、HEK-293肾细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HEp-2——人喉癌上皮细胞系等是已知的。这种细胞系的产生在例如EP833934(Crucell)中被描述。这种细胞系被用于例如药物测试。然而，这种细胞系的缺陷是基因突变(例如，点突变、染色体片段交换(重排)、基因拷贝数增加(基因扩增)和甚至染色体组的改变(非整倍性))以及由无限增殖化和无限分裂的产生的肿瘤特性。在培养过程中，已知这种细胞系中的细胞通过自发突变逐渐改变；它们可以发展成恶性细胞群体并且具有遗传不稳定性。根据发明人的发现，在这种情况下，培养中累积突变的临界点出现在仅仅在约60次细胞分裂之后。这种突变能够导致癌基因的激活或导致肿瘤抑制基因的失活。从而，作为累积突变的结果，细胞群体可以被具有增加的增殖活性的细胞浸润。这种选择过程对应于肿瘤形成的癌前阶段；另外，多数商业可用的细胞系已经经过了未知次数的倍增，并且甚至其自身可能是源于恶性肿瘤细胞。

表1：与其他细胞系相比具有扩大的倍增能力的细胞的特性

  细胞系统特性  原代细胞  具有扩大的倍增  能力的细胞  瘤细胞系  产生  来自天然的组织  来自原代细胞  来自肿瘤  可能的细胞分裂次数  限于  10-25^a  限于  30-60  无限的  表型  天然的  天然的  改变的  遗传稳定  是  是  否  在软琼脂中的生长^b  否  否  是  在体内的肿瘤生长^c  否  否  是