[发明专利]通过环状变换得到的新的蛋白变异体

权利要求书

1.选自下列的多肽：

a)天然表达为前蛋白、蛋白原和/或前蛋白原的蛋白的成熟蛋白的环状变换变异体，

b)(a)的环状变换变异体的变异体，与包含和/或不包含桥接接头序列的(a)的环状变换变异体的序列相比，具有至少80％的序列同源性和/或序列同一性，

c)(a)的环状变换变异体的变异体，与包含和/或不包含桥接接头序列的(a)的多肽的多肽序列相比，具有多达30个氨基酸的取代、插入、缺失或倒位，

d)包含(a)、(b)或(c)的蛋白变异体的多肽。

2.权利要求1的多肽，其中天然表达为前蛋白、蛋白原和/或前蛋白原的蛋白是酶。

3.权利要求2的多肽，其中酶是蛋白酶。

4.权利要求3的多肽，其中蛋白酶是枯草溶菌素类型的碱性蛋白酶。

5.权利要求4的多肽，其中枯草溶菌素类型的碱性蛋白酶选自BLAP、BPN′和枯草溶菌素Carlsberg，及其同源物。

6.权利要求5的多肽，其中BLAP的环状变换变异体选自与SEQID NO：5或SEQ ID NO：6的多肽具有至少80％的序列同源性和/或同一性的多肽，和/或选自与具有SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的多肽序列的多肽相比，具有多达30个氨基酸的插入、缺失或倒位的多肽。

7.权利要求1到6任一项的多肽，其中成熟蛋白的原始末端通过长度为1到40个氨基酸的接头彼此桥接。

8.权利要求1到7任一项的多肽，其中环状变换变异体的新末端距原始末端至少10个氨基酸。

9.权利要求1到8任一项的多肽，其中环状变换变异体的新末端位于初始蛋白的环的区域中。

10.权利要求1到8任一项的多肽，其中环状变换变异体的新末端不位于初始蛋白的环的区域中。

11.用于制造天然表达为前蛋白、蛋白原和/或前蛋白原的蛋白的环状变换变异体的方法，包括下列步骤：

a)使用成熟蛋白的DNA执行环状变换方法，

b)将使用(a)的方法获得的DNA，以相对于编码信号肽、前肽和/或前肽原的DNA来说3’的方向整合到适合的载体中，

a)将载体导入用于表达DNA的适合的宿主中，以及如果可行的话，纯化获得的蛋白。

12.多核苷酸，选自：

a)天然表达为前蛋白、蛋白原和/或前蛋白原的蛋白的成熟蛋白的环状变换变异体的编码多核苷酸，

b)(a)的多核苷酸的突变体，与包含和/或不包含桥接接头的编码序列的(a)的多核苷酸相比，具有至少80％的序列同源性和/或序列同一性，

c)(a)的多核苷酸的突变体，与包含和/或不包含桥接接头的编码序列的(a)的多核苷酸的多核苷酸序列相比，具有多达50个核苷酸的取代、插入、缺失或倒位，特别是具有正好一个核苷酸的插入或缺失，

d)包含(a)、(b)或(c)的多核苷酸的多核苷酸，

e)编码权利要求1到8任一项的多肽的多核苷酸，

f)与(a)、(b)、(c)、(d)或(e)的多核苷酸互补的多核苷酸。

13.权利要求12的多核苷酸，其中天然表达为前蛋白、蛋白原和/或前蛋白原的蛋白是酶。

14.权利要求13的多核苷酸，其中酶是蛋白酶。

15.权利要求14的多核苷酸，其中蛋白酶是枯草溶菌素类型的碱性蛋白酶。

16.权利要求15的多核苷酸，其中枯草溶菌素类型的碱性蛋白酶选自BLAP、BPN′和枯草溶菌素Carlsberg。

17.权利要求16的多核苷酸，编码的BLAP的环状变换变异体选自与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的多肽具有至少80％的序列同源性和/或同一性的多肽。

18.载体，其含有权利要求12到17任一项的多核苷酸。

19.宿主细胞，其含有权利要求1到10任一项的多肽，含有权利要求12到17任一项的多核苷酸，和/或含有权利要求18的载体。